[发明专利]一种甄别独立样品自身交叉反应的免疫组库方法

摘要

本发明涉及一种甄别独立样品自身交叉反应的免疫组库方法，其特征在于：以大于10ng的RNA为起始量，利用RACE的原理使得RNA在进行逆转录成cDNA的时候进行模板转换，在PCR扩增前进行2次预扩增实验，第一次预扩增使用带UMI的上游引物，使得原来的模板的5`端带上了UMI，第二次预扩增使用带UMI的下游引物，使得模板的3`端带上了UMI，再以此带有双端UMI的产物作为模板进行PCR扩增，最终得到的产物经过纯化并连接上测序接头序列得到最终的测序文库，本方法使得每条cDNA的两端都标记上不同的且唯一的UMI序列，在完成PCR扩增后可以把多个样品合并构建一个文库，可以解决样品内相似序列在PCR扩增反应时产生的交叉反应问题，对于不同细胞受体来源的样品，在PCR扩增时均能实现只使用一对引物进行PCR扩增，实现等效扩增，解决了因多重引物扩增而产生的引物偏好性问题。

主权项

1.一种甄别独立样品自身交叉反应的免疫组库方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、cDNA模板制备：以大于10ng的RNA为起始量，利用RACE的原理使得RNA在进行逆转录成cDNA的时候进行模板转换成带一段固定接头的cDNA；S2、接着cDNA模板在PCR扩增前进行2次预扩增，第一次预扩增使用带UMI的上游引物，使得原来的模板的5`端带上UMI，形成产物A；S3、经纯化后，把产物A进行第二次预扩增，使用带UMI的下游引物，使得模板的3`端带上了UMI，形成产物B；S4、经纯化后，以步骤S3中的带有双端UMI的产物B作为模板进行PCR扩增，最后得到产物C；S5、步骤S4中得到的最终产物C经过纯化并连接测序接头序列得到最终的测序文库。