[发明专利]Bar单抗杂交瘤细胞株、产生的抗体及其制备方法有效
| 申请号： | 201910483419.X | 申请日： | 2019-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN110205300B | 公开（公告）日： | 2021-05-04 |
| 发明（设计）人： | 刘卫晓;张哲;金芜军;董美;高进;李亮;宛煜嵩 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/12;G01N33/577;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京知汇林知识产权代理事务所(普通合伙) 11794 | 代理人： | 董涛 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了属于生物工程领域的Bar单抗杂交瘤细胞株、产生的抗体及其制备方法。本发明利用工程菌株表达、纯化得到的高纯度抗除草剂蛋白Bar作为抗原，通过杂交瘤技术制备了分泌抗Bar的特异、灵敏单抗的Bar单抗杂交瘤细胞株(PA1‑18030030/1B8 3D6)和Bar单抗杂交瘤细胞株(PA1‑18030030/6F5 1D2)，保藏编号依次为CGMCC No.17083和CGMCC No.17084。细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价分别为1:1024000和1:640000，抗体亚型均为IgG1，该单抗可以特异识别原核表达的重组Bar蛋白及转基因水稻中的内源Bar蛋白，分泌抗Bar抗除草剂蛋白的鼠单抗杂交瘤细胞株的构建为转基因水稻中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑。 | ||
| 搜索关键词： | bar 杂交瘤 细胞株 产生 抗体 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种Bar单抗杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)通过原核表达得到Bar重组蛋白；b)免疫动物：将Bar重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5‑7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。
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