[发明专利]转伴矿景天SpHMA2和SpHMA3的重金属超富集转基因工程油菜的创制及应用在审
| 申请号： | 201910485290.6 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110527694A | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 杜鹰;陈坤明;袁博;刘佳兰;李永辉;白帆;魏伟;刘捷 | 申请（专利权）人： | 广东开源环境科技有限公司;西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20;B09C1/10 |
| 代理公司： | 44215 东莞市华南专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 赵超群<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 523000 广东省东莞市南城街*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种转伴矿景天SpHMA2和SpHMA3双基因的重金属超富集转基因工程油菜的创制方法，包括：克隆伴矿景天中SpHMA2和SpHMA3双基因；以植物表达载体为基础，构建包含强启动子、筛选基因的转化载体，将SpHMA3基因通过双酶切法连接到所述转化载体的酶切位点，将SpHMA2基因通插入所述转化载体，获得双基因超量表达双元载体；将双基因超量表达双元载体通过根癌农杆菌转入油菜下胚轴切段中，培育转基因苗并筛选双基因聚合表达的转基因阳性植株。本发明提供的培育方法可解决野生重金属富集植株耐性有限、成长缓慢、生物量小、生长环境特殊以及重金属重返等问题。此外，本发明还提供上述创制方法中所得的重金属超富集转双基因植株在土壤重金属修复中的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 双基因 转化载体 重金属超富集 伴矿景天 超量表达 双元载体 植株 油菜 植物表达载体 根癌农杆菌 培育转基因 土壤重金属 下胚轴切段 重金属富集 转基因工程 酶切位点 强启动子 筛选基因 生长环境 阳性植株 生物量 双酶切 转基因 基因 重金属 构建 聚合 克隆 筛选 修复 转入 培育 应用 | ||
【主权项】：
1.一种转伴矿景天SpHMA2和SpHMA3双基因的重金属超富集转基因工程油菜的创制方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)重金属超富集基因的克隆/n分别克隆伴矿景天中SpHMA2和SpHMA3基因；/n(2)超量表达双元载体的构建/n以植物表达载体为基础，构建包含强启动子、筛选基因的转化载体，将步骤(1)克隆得到的SpHMA3基因通过双酶切法连接到所述转化载体得到中间转化载体，再将克隆得到的SpHMA2基因通过同源重组方法插入到中间转化载体，获得双基因超量表达双元载体；/n(3)重金属超富集转基因植株构建/n将步骤(2)所得的双基因超量表达双元载体通过根癌农杆菌转入油菜下胚轴切段中，用筛选培养基进行筛选培养，获得的转基因抗性油菜下胚轴切段经过诱导、分化、生根、转基因苗的锻炼和移栽，筛选获得双基因聚合表达的转基因阳性植株；/n其中，所述SpHMA2基因核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述重金属超富集SpHMA3基因核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述油菜品种为甘蓝型油菜K407。/n
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