[发明专利]一种基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法在审
| 申请号： | 201910485738.4 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110184333A | 公开（公告）日： | 2019-08-30 |
| 发明（设计）人： | 黄拔严;张彦伟 | 申请（专利权）人： | 北京益序医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京智行阳光知识产权代理事务所(普通合伙) 11738 | 代理人： | 黄锦阳 |
| 地址： | 100000 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法，包括步骤一，模板的制备；步骤二，引物的合成与准备；步骤三，结果的判定；模板的制备包括以下步骤：用清水漱口后，采集口腔脱落细胞，采集时将口腔脱落细胞采集拭子伸进口腔壁，紧靠脸颊内侧上下刮拭30～40次；用1mL TE将细胞涮洗下来，进行离心分层；弃上清，沉淀用50μL TE重悬，即可作为模板；准备PCR引物序列：设定PCR体系和PCR程序根据熔解曲线的峰型判定基因型；该基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法，采用单步分析方法，细胞采集后直接进行分析，无需核酸提取，步骤简单，且对照与目标基因的分析单管内就可以实现，减少实验步骤及成本，且荧光通道只要一个，对设备要求低。 | ||
| 搜索关键词： | 熔解曲线分析 缺失检测 口腔脱落细胞 采集 制备 判定 核酸提取 离心分层 目标基因 熔解曲线 实验步骤 细胞采集 荧光通道 分析 漱口 对设备 基因型 进口腔 脸颊 单步 单管 峰型 紧靠 拭子 引物 重悬 涮洗 沉淀 清水 合成 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法，包括步骤一，模板的制备；步骤二，引物的合成与准备；步骤三，结果的判定；其特征在于：其中在上述步骤一中，模板的制备包括以下步骤：1)用清水漱口后，采集口腔脱落细胞；2)用1mL TE将细胞涮洗下来，进行离心分层；3)弃上清，沉淀用50μL TE重悬，即可作为模板；其中在上述步骤二中，引物的合成与准备包括以下步骤：1)PCR引物序列：①GSTM1‑F GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC；②GSTM1‑R GTTGGGCTCAAATATACGGTGG；③BCL2‑F GCAATTCCGCATTTAATTCATGG；④BCL2‑R GAAACAGGCCACGTAAAGCAAC；2)PCR体系：①5ul的Talent qPCR Premix反应液2个；②2ul的引物混合液；③1ul的模板；④2ul的水；3)PCR程序：①95℃，10min；②95℃，5s，63℃，25s，72℃，20s，38个循环；③95℃，10s；65℃，60s；温度缓慢且匀速的升至98℃，每摄氏度采集五个数据点；其中在上述步骤三中，根据熔解曲线的峰型判定基因型。
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