[发明专利]一种异种器官移植基础供体猪的构建方法在审
| 申请号： | 201910497791.6 | 申请日： | 2019-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN110373390A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 魏红江;赵红业;赵恒;角德灵;徐凯祥 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京名华博信知识产权代理有限公司 11453 | 代理人： | 李中强 |
| 地址： | 650201 云南省昆*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种异种器官移植基础供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因，并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46多基因修饰的异种移植供体基础猪。本发明在一定程度上解决了异种器官移植中存在的抗原抗体免疫排斥反应及补体调节的共性问题，为在基础供体猪的基础上研究开发适合心脏、肾脏、肝脏等器官及胰岛、皮肤等组织特异性的异种器官移植供体猪的构建奠定了基础，对构建多基因修饰的异种移植供体猪具有重要的应用价值和应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 供体猪 构建 异种器官移植 异种移植 多基因 修饰 体细胞核移植技术 胎儿成纤维细胞 动物生物技术 免疫排斥反应 组织特异性 个人源化 共性问题 抗原抗体 修饰基因 基因 补体 供体 敲除 肾脏 胰岛 肝脏 应用 器官 皮肤 心脏 开发 研究 | ||
【主权项】：
1.一种异种器官移植基础供体猪的构建方法，其特征在于：具体步骤为：1）敲除猪基因组中引起抗原抗体免疫排斥反应的基因在猪成纤维细胞系的基础上，利用CRISPR/Cas9基因技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个特异基因；2）定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因在GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO三基因修饰的基础上，再定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，获得GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因共同修饰的猪成纤维细胞系；3）体细胞核移植和胚胎移植利用体细胞核移植技术，将经转染筛选获得的GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因细胞系进行体细胞核移植，待妊娠时取出胎儿鉴定胎儿相关基因的编辑情况，分离培养建立六基因异种移植基础供体猪成纤维细胞系，或待胎儿发育至出生时获得异种器官移植基础供体猪；4）利用连续克隆技术，将上述获得的六基因修饰的异种移植基础供体猪胎儿成纤维细胞系进行体细胞核移植和胚胎移植，批量获得异种器官移植基础供体猪，为适合各种器官移植供体猪的开发做准备。
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