[发明专利]受DNA guide引导的具有核酸内切酶活性的RecJ蛋白及其在基因编辑中的应用有效
| 申请号： | 201910509798.5 | 申请日： | 2019-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN110093390B | 公开（公告）日： | 2021-08-27 |
| 发明（设计）人： | 郑明刚;王玲;徐孟欣;王闻;马粒雅;吕巧 | 申请（专利权）人： | 青岛大学;自然资源部第一海洋研究所;中国大洋矿产资源研究开发协会（中国大洋事务管理局）;青岛科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12P19/34;C40B50/06 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266071 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供一种受DNA guide引导的具有核酸内切酶活性的BaRecJ蛋白及其突变体BaRecJM在基因编辑中的应用。本发明提供的是一种来源于细菌的RecJ核酸酶，其能够结合磷酸化的小DNA,对互补的目标DNA特定位点发挥核酸内切酶作用，进行基因编辑；所述的BaRecJ核酸酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明另一个方面还提供上述BaRecJ核酸酶的突变体，从而有效的削弱其外切酶活性，增强受DNA guide引导对目标DNA的定点剪切能力；所述RecJ核酸酶的突变体BaRecJM，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3。目前报道的受DNA片段引导进行剪切的Ago蛋白来自嗜热菌，需要大于65℃才能发挥作用。本发明的BaRecJ及其突变体BaRecJM能够在37℃的温和条件下对DNA双链进行剪切，从而更方便进行基因工程操作。 | ||
| 搜索关键词： | dna guide 引导 具有 核酸 内切酶 活性 recj 蛋白 及其 基因 编辑 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种RecJ核酸酶，其特征在于：a)序列为SEQ ID NO:1的酶蛋白，b)从细菌中获得的，与序列为SEQ ID NO:1的酶蛋白具有55％或以上相似性的，具有核酸酶内切酶和外切酶功能的酶；c)对序列为SEQ ID NO:1蛋白的一个或多个氨基残基进行突变所获得的，具有核酸酶内切酶和外切酶功能的蛋白。
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