[发明专利]一种杂交瘤细胞克隆化的方法

摘要

一种杂交瘤细胞克隆化的方法，属于单克隆抗体的制备技术，用有限稀释法对1个阳性孔进行1次克隆化操作需1～3块96孔细胞培养板，而用单细胞显微操作法进行克隆化时，每块96孔细胞培养板可克隆化3～6个阳性孔，节省实验材料；对于有限稀释法，一般需进行2～3次或更多次克隆化才能基本保证杂交瘤细胞株的单克隆性，而对于单细胞显微操作法，一般进行1次克隆化就能保证其单克隆性，节省了时间；与有限稀释法相比较，单细胞显微操作法显然更能确保杂交瘤细胞株的单克隆性，方法更为可靠；相较于流式细胞分选，该方法科学、合理，不需要特殊仪器，操作简单，更适合实验室制备一般用途单抗。

主权项

1.一种杂交瘤细胞克隆化的方法，其特征在于：所述克隆化的方法包括如下步骤：(1)取一无菌平皿，加入3 mL 37 ℃预热的DMEM完全培养基；(2)用枪头轻轻吹吸，重悬细胞；吸取5～10 μL细胞悬液加至平皿中；(3)轻轻摇动平皿以混匀细胞，静置3 min，将平皿放在倒置显微镜下观察，确保视野内只有1～2个可见的细胞；(4)寻找亮而圆的细胞，用移液抢吸取单个细胞；(5)将吸取的单个细胞加到铺有饲养层细胞的96孔板中；(6)将步骤(5)中的单个细胞置37 ℃、5% CO₂培养箱中培养。