[发明专利]一种神经元冻存液的制备方法有效
| 申请号： | 201910517771.0 | 申请日： | 2019-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN110199985B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 郭安臣;王群;王拥军 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京天坛医院 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京东方灵盾知识产权代理有限公司 11506 | 代理人： | 苏向银;马敬 |
| 地址： | 100006 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种神经元冻存液的制备方法，包括以下步骤：取样、消化、制备细胞悬液、冻存以及复苏步骤；所用的神经元冻存液以及培养基中均不含有谷氨酰胺。上述神经元冻存液的制备方法中，将原代神经元与本发明的冻存液混合后冻存，能够降低神经元冻存损伤，复苏后神经元活率高，活性强。进一步地，本发明的取样分离神经组织的方法快捷方便，避免神经元损伤和细胞污染，提高取样效率并且有利于后续消化处理。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 神经元 冻存液 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种神经元冻存液的制备方法，其特征在于，所述神经元冻存液的制备方法包括以下步骤：取样：取离体哺乳动物的神经组织，剪碎后置于第一离心管中以800～1200rpm离心4～6min，去除离心上清液；消化：向所述第一离心管中加胰酶，将所述第一离心管中的沉淀细胞吹开，抽出沉淀细胞置于消化培养皿中，向所述消化培养皿中追加胰酶，将所述消化培养皿放置于37℃培养箱中8～12min后，向所述消化培养皿中加入种植培养基终止消化；制备细胞悬液：将所述消化培养皿中的混合物经细胞筛过滤后，加入第二离心管中，以800～1200rpm离心4～6min，离心后去除上清液，制得原代神经元；冻存：将所述原代神经元与冻存液混合后制得冻存细胞液，将所述冻存细胞液置于冻存管中，于‑20℃冰箱内冷冻1.0～2.0h后于‑80℃冰箱内冷冻；复苏：将所述冻存管快速置于37℃水浴中速溶，将融解后的所述冻存细胞液以800～1200rpm离心4～6min，离心后去除上清液，制得冻存后神经元，将所述冻存后神经元转入种植培养基或复苏培养基培养；所述神经元冻存液、所述种植培养基以及所述复苏培养基中均不含有谷氨酰胺。
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