[发明专利]哺乳动物细胞非易感H9N2亚型冷适应禽流感病毒的拯救在审
| 申请号： | 201910524214.1 | 申请日： | 2019-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN110305898A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 彭大新;查夕馨;陈素娟;秦涛 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N7/00;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 刘妍妍 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及动物疫苗技术领域，尤其涉及转染293T和DF‑1共培养细胞的H9N2亚型冷适应减毒活疫苗的拯救方法。选择一株H9N2亚型冷适应减毒株TX‑25‑CE30，构建表达其基因的8个质粒，以TX‑25‑CE30内部基因为骨架，以其母本毒株TX株HA、NA基因为外部基因，转染人胚肾细胞293T与鸡成纤维细胞系DF‑1共培养细胞，拯救出对哺乳动物细胞感染能力较弱的毒株，命名为rTXca‑HA‑NA，该重组病毒免疫鸡后对同源毒株的一次免疫保护率可达100％。 | ||
| 搜索关键词： | 亚型 哺乳动物细胞 培养细胞 毒株 转染 母本 成纤维细胞系 减毒活疫苗 免疫保护率 禽流感病毒 人胚肾细胞 动物疫苗 同源毒株 外部基因 重组病毒 减毒株 免疫鸡 构建 质粒 感染 基因 | ||
【主权项】：
1.哺乳动物细胞非易感H9N2亚型冷适应禽流感病毒的拯救方法，包括：提取病毒尿囊液总RNA，随后用反转录PCR分别扩增病毒的8个基因片段；PCR产物经琼脂糖凝胶电泳、凝胶纯化试剂盒纯化并回收后，与pEASY‑Blunt3载体连接，作为中间过渡质粒；质粒经测序验证序列正确后，用相应的核酸内切酶进行酶切；酶切的目的产物经琼脂糖凝胶电泳、凝胶纯化试剂盒纯化后克隆至pHW2000载体，提取质粒并保存于‑70℃环境下。
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