[发明专利]一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法及应用，该发明属于纳米材料与免疫分析技术领域；本发明以牛血清蛋白BSA还原的金纳米簇Au₂₅作为基底材料和电致发光体，以C‑反应蛋白CRP作为目标分析物，通过共价交联结合抗体定向捕获剂HWRGWVC，提出了一种抗体定向固定传感策略。以BSA‑Au₂₅/HWRGWVC作为传感平台构建的无标记型ECL免疫传感器，抗体捕获率以及活性较传统模式有明显的提升，同时该传感器有着超高的灵敏度以及极低的检测限，在免疫分析领域有着广阔的应用前景。

主权项

1.一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 将玻碳电极分别在乙醇和去离子水中超声清洗30 s，依次用1.0 μm, 0.3 μm和0.05 μm的Al₂O₃抛光粉对其抛光使之类似镜面般光滑，用氮气吹干；(2) 将6 μL分散均匀、浓度为1 ~ 3 mg/mL的BSA‑Au₂₅溶液滴涂至玻碳电极表面，室温下自然晾干；(3) 将上述晾干的玻碳电极插入5 ~ 10 μg/mL的HWRGWVC溶液中，于4 ^oC下孵化30 min，超纯水洗净，室温下自然晾干；(4) 滴加6 μL 质量分数为0.1%的牛血清蛋白溶液，使之封闭非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，室温下自然晾干；(5) 滴加6 μL浓度为1 ~ 2 μg/mL的anti‑CRP标准溶液，于4 ^oC下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ^oC晾干；(6) 滴加6 μL未知浓度的CRP溶液，于4 ^oC下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ^oC晾干，传感器构建完毕。