[发明专利]一种红掌的快速培养方法

摘要

本发明涉及一种红掌的快速培养方法，包括无菌苗培养、原生质体分离、原生质体培养、原生质体植株再生，其通过在原生质体植株再生阶段，加入等量的第二MS培养基，并通过培养基的组分选择及配比，降低了渗透压和细胞密度，而且，培养板与第三MS培养基的结合使用，确保了植物来自单个细胞，提高了萌芽率及再生速度。

主权项

1.一种红掌的快速培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）无菌苗培养：以无激素MS培养基体外培养的红掌幼苗为材料，进行20小时光照；/n（2）原生质体分离：选择幼叶切成长条，置于装有酶溶液的烧瓶中，酶溶液含有5%（w/v）纤维素酶R-10、0.5%（w/v）果胶酶Y-23以及10%（w/v）甘露醇，搅拌并使酶溶液通过真空泵渗透，然后将酶溶物和幼叶长条倒入培养皿中，在25°C下培养30分钟，搅拌10s，在25°C下再培养30分钟；分离的原生质体通过筛网过滤，并在100 x g下离心10分钟，使原生质体在20%（w/v）蔗糖溶液中悬浮，将10%（w/v）甘露醇溶液轻轻地滴于悬浮液的顶部，在50×g下离心10分钟后，将界面处的完整原生质体通过吸管吸出，在10%（w/v）甘露醇中洗涤两次；/n（3）原生质体培养：原生质体在培养皿中以第一MS培养基培养，第一MS培养基中含有MS盐、0.3 mg/L的盐酸硫胺、0.5mg/L的NAA、0.1 mg/L的BAP、10%（w/v）葡萄糖和6%（w/v）蔗糖，第一MS培养基的pH为5.5；/n（4）原生质体植株再生：每5天向步骤（3）的培养皿中加入等量的第二MS培养基，该第二MS培养基含有MS盐、0.3 mg/L的盐酸硫胺、0.5mg/L的NAA、0.1 mg/L的BAP、5%（w/v）葡萄糖和3%（w/v）蔗糖，直到群落长到0.2-0.3mm，然后将群落转移到培养板，该培养板包括滤纸基板和转移板，该培养板被放置在第三MS培养基上10-20天，然后将单个愈伤组织放置在第三MS培养基上14-20天，以产生2-6 mm的愈伤组织，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。/n