[发明专利]一种红掌的培育方法

摘要

本发明涉及一种红掌的培育方法，包括红掌苗培养、原生质体分离、原生质体培养和原生质体再生，与用切片叶片制成的样本相比，研磨技术对叶组织的损伤较小，因此原生质体的产量较高，另外，本发明采用原研的水解酶材料，相比其他细胞壁水解酶，如小豆粕纤维素酶RS和纤维素酶R‑10等，当以相同浓度使用时，发现释放原始细胞的效果更优，且通过荧光灯和白炽灯组合供光，室温下光照18小时后，将培养室的温度调整为22℃，然后在黑暗条件下培养10小时，且以特定的光通量密度，改善了育苗效果。

主权项

1.一种红掌的培育方法，其特征在于，依次包括如下步骤：/n（1）红掌苗培养：将红掌种子在培养室中培养，培养条件为：荧光灯和白炽灯组合供光，室温下光照18小时后，将培养室的温度调整为22℃，然后在黑暗条件下培养10小时，恢复光照，之后每天用稀释的营养液浇灌，20天后将完全展开的初生叶用于原生质体分离；/n（2）原生质体分离：将完全展开的初生叶从植物上脱离，用蒸馏水清洗后吸干水分，放在混合有金刚砂的蒸馏水中使用医用棉签轻轻研磨，然后再次冲洗磨损的叶子以除去金刚砂，再吸干水分，将磨损的叶子切成1×1μm的正方形，并漂浮在培养基上，使叶子表面与培养基接触，该培养基含有2.5%（w/v）的纤维素酶、0.5%（w/v）果胶酶Y-23、9%（w/v）的甘露醇、0.1 mg/L的氯化钙、2%（w/v）的BSA和5mM的MES，该培养基的pH为5.8；在120μE/m2·s的光通量密度、28℃下照射4-5小时，随后通过筛网过滤，并用含有9%（w/v）的甘露醇，0.05 mg/L的氯化钙，0.1％（w/v）BSA的缓冲液洗涤两次，滤液在100x g下离心3分钟，使原生质体在20%（w/v）蔗糖溶液中悬浮，将10%（w/v）甘露醇溶液轻轻地滴于悬浮液的顶部，在100×g下离心5分钟后，将界面处的完整原生质体通过吸管吸出，在9%（w/v）甘露醇中洗涤两次；/n（3）原生质体培养：原生质体在培养皿中以含有MS盐、0.2mg/L的NAA、0.3mg/L的BAP、10%（w/v）葡萄糖和6%（w/v）蔗糖，且pH为5.8的培养基中培养；/n（4）原生质体植株再生：每5天向步骤（3）的培养皿中加入等量的第二MS培养基，该第二MS培养基含有MS盐、0.5mg/L的NAA、0.1 mg/L的BAP、5%（w/v）葡萄糖和3%（w/v）蔗糖，直到群落长到0.2-0.3mm，然后将群落转移到培养板，并将培养板放置在第三MS培养基上14-21天，然后将单个愈伤组织放置在第三MS培养基上21-28天，以产生2-4 mm的愈伤组织，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。/n