[发明专利]利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法

摘要

本发明涉及利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，该方法可以显著提高调节性T细胞(Tregs细胞)的纯度与免疫调节功能，所述方法首先取对数生长期的ASC种植在三维载体上，预活化处理后再使用γ射线对ASC进行辐照处理，作为饲养层；使用免疫磁珠法从外周血单个核细胞分选纯化得到CD4+CD25+T细胞；然后将三维ASC饲养细胞与CD4+CD25+T细胞进行共同培养，并加入白介素‑2、anti‑CD3抗体和anti‑CD28抗体等刺激Tregs细胞进入有丝分裂。对扩增后得到的Tregs细胞进行检测，结果发现利用三维培养的ASC细胞作为饲养层对Tregs细胞进行扩增，可以显著地提高Tregs细胞的纯度，并高表达IL‑10等免疫调控基因。

主权项

1.利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)三维饲养层细胞体系的制备：抽取脂肪进行消化，过滤得到单细胞悬液；向其中加入ASC扩增培养基进行培养，得到传代细胞；将传代细胞滴加到三维培养载体上，加入ASC预活化培养基继续培养，最后连同三维培养载体一起经γ射线辐照，得到所述三维饲养层细胞体系；(2)免疫磁珠细胞分选法分离CD4⁺CD25⁺T细胞：采集新鲜成人外周血，使用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，加入抗CD4和CD25免疫磁珠进行分选，获得CD4⁺CD25⁺T细胞；(3)体外扩增培养：将步骤(2)中获得的CD4⁺CD25⁺T细胞加入到含有步骤(1)所得三维饲养层细胞体系的培养瓶中，加入CD4⁺CD25⁺T细胞扩增培养基进行共培养，得到所述高活性Tregs细胞。