[发明专利]一种重组慢病毒载体、重组慢病毒在审
| 申请号： | 201910536606.X | 申请日： | 2019-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN110734930A | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 王磊;张德庆;胡俊;杨国华 | 申请（专利权）人： | 武汉百翼生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/66;C12N15/67;C12N7/01 |
| 代理公司： | 31253 上海精晟知识产权代理有限公司 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，尤其是一种重组慢病毒载体、重组慢病毒，重组慢病毒载体主要以慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑GFP+Puro为骨架，在慢病毒载体pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑GFP+Puro上插入信号肽序列S，并通过重组慢病毒载体将293T细胞转染成慢病毒后感染细胞，并转染成本远远低于脂质体，感染效率高；另外，可以筛选出过表达稳定细胞株，进行无血清悬浮培养，分泌表达目的蛋白，能大大提高蛋白产量，有效降低杂蛋白比例；另外，通过引入His标签，从而有利于表达蛋白的检测和纯化。 | ||
| 搜索关键词： | 重组慢病毒载体 慢病毒载体 基因工程技术 重组慢病毒 表达蛋白 表达稳定 插入信号 分泌表达 感染细胞 目的蛋白 细胞转染 悬浮培养 慢病毒 无血清 细胞株 杂蛋白 脂质体 肽序列 转染 蛋白 筛选 感染 引入 检测 | ||
【主权项】：
1.一种重组慢病毒载体、重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒载体主要以慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro为骨架，在慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro上插入信号肽序列S，具体的实施过程如下；/n步骤1：将载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro进行XbaI和EcoRI双酶切，回收载体骨架部分，设计并合成带有XbaI和EcoRI粘性末端的信号肽序列S；/n步骤2：将载体骨架部分用连接酶与信号肽序列S进行连接，获得重组载体，命名为pCDH-S；/n步骤3：以重组载体pCDH-S的NotI酶切位点处设计上游引物，插入纯化标签6×His序列和终止密码子，得到改装的慢病毒载体pCDH-CMV-HSA-MCS-6His-EF1-GFP+Puro；/n步骤4：将6His-OPN片段插入到改装的慢病毒载体的XbaI和EcoRI双酶切位点之间，以PstI酶切位点处设计下游引物，以重组载体pCDH-S为模板，通过PCR反应获得含His标签的PCR产物；/n步骤5：将含His标签的PCR产物与重组载体pCDH-S分别经NotI和PstI双酶切后连接构建重组慢病毒载体pCDH-CMV-HSA-6′His-OPN-6His-EF1-GFP+Puro。/n
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