[发明专利]一种急性肺损伤小鼠肺脏全免疫细胞特征图谱的建立方法

摘要

本发明涉及肺脏全免疫细胞特征图谱研究，旨在提供一种急性肺损伤小鼠肺脏全免疫细胞特征图谱的建立方法。包括步骤：小鼠肺脏全免疫细胞的提取；质谱流式抗体的标记；免疫细胞抗体染色；质谱流式分析。本发明能够在保证细胞纯度的基础上，分离出高得率的小鼠肺脏全免疫细胞。分离的小鼠肺脏全免疫细胞得率高于研磨法，且细胞活率大于传统研磨法。本发明创新性地使用试剂盒以稳定金属同位素与抗体连接，同时基于通道干扰最小原则设计质谱流式通道，实现全面小鼠对肺脏全免疫细胞的分类和功能进行描述。能够对小鼠肺脏免疫细胞进行系统性的检测和分类，最多可同时检测43个标志物；观察到小鼠肺脏全免疫细胞的动态改变。

主权项

1.一种急性肺损伤小鼠肺脏全免疫细胞特征图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)小鼠肺脏全免疫细胞的提取取因急性肺损伤自然死亡的新鲜小鼠尸体，灌流出肺脏内部血液后摘取肺脏；将肺脏剪碎后以酶混合液消化半个小时，再进行密度梯度离心和红细胞裂解，得到纯净的小鼠肺脏全免疫细胞；(2)质谱流式抗体的标记使用美国Fluidigm公司的MaxPAR X8抗体偶联试剂盒，以稳定的金属同位素与小鼠肺脏免疫细胞表面标志物抗体连接，得到标记抗体；(3)免疫细胞抗体染色将分离得到的小鼠肺脏全免疫细胞与标记抗体进行孵育，标记免疫细胞；(4)质谱流式分析将标记后的小鼠肺脏全免疫细胞在质谱流式上机分析，采用t‑SNE和X‑shift算法对所得数据进行分析；然后将不同的细胞亚群的多个检测抗体的表达分布在同一张热图上，并通过viSNE图表现不同标志物的表达以及不同细胞亚群的分布，以此表现小鼠肺脏全免疫细胞的分类图谱。