[发明专利]一种脱细胞神经支架的制备方法及其效果评价方法

摘要

本发明公开了一种脱细胞神经支架的制备方法及其效果评价方法，该制备方法采用TritonX‑100加冻融酶的复合方法进行脱细胞神经支架制备。通过形态学观察、超微结构观察、细胞毒性检测、生物相容性检测、复合体冰冻切片观察等方法对脱细胞神经支架的脱细胞效果进行评价。结果显示采用TritonX‑100加冻融酶的复合方法制备的脱细胞神经支架，脱细胞效果充分、支架三维空间结构完整、管道通畅，与细胞、组织相容性好，炎症反应轻微，细胞生长增殖状态良好，适合细胞的黏附生长，是一种理想的支架材料。

主权项

1.一种脱细胞神经支架的制备方法，其特征在于采用TritonX-100加冻融酶的复合方法进行脱细胞神经支架制备，包括如下步骤：/n1.1动物称重，以质量浓度3.5%的水合氯醛麻醉动物，待麻醉生效后，用体积浓度75%的乙醇浸泡消毒10-15min，切片，分离肌肉，无菌条件下切取双侧坐骨神经；将坐骨神经放于装有超纯水的培养皿中，室温下震荡24-25小时；/n1.2在质量浓度0.5%的TritonX-100溶液中震荡36-37小时；/n1.3然后转入液氮中反复冻融5-6次；/n1.4将冻融后的坐骨神经移入装有胰酶的培养皿中，37℃过夜；然后用DNase-I、RNase-A进行处理，37℃ 2-2.5h；/n1.5后转入蒸馏水中振荡、漂洗，每1-1.5小时换液1次；/n1.6将坐骨神经取出，进行修剪定型，即为做好的脱细胞支架材料，转入PBS缓冲液中4℃，pH 7.2保存；/n1.7脱细胞支架材料消毒处理：支架消毒剂选用质量浓度为0.1％的PAA；室温下，将脱细胞支架材料放入15ml离心管中，倒入新鲜配置的质量浓度为0.1％的PAA，浸泡消毒 3-3.5 h，超净台内无菌PBS震荡24-25h，毎2-2.5h换液一次，漂洗结束，封口膜封管，4℃保存备用。/n