[发明专利]一种增加家蚕雌蛾产卵数量的技术方法

摘要

本发明公开了一种增加家蚕雌蛾产卵数量的技术方法。从家蚕蛹脂肪体中提取总RNA，逆转录获得第1链cDNA，并以其为模板RT‑PCR扩增，克隆获得BmAKHR cDNA并且作为模板PCR扩增，酶切后将DNA片段连接载体获得pFLAG‑BmAKHR，再PCR扩增获得反应模板，并进一步处理得到BmAKHR siRNA；将BmAKHR siRNA液过滤膜除菌，注射入蚕腹部，桑叶饲养至成熟结茧，化蛹并化蛾后正常交配，产下的蚕卵数量增加。本发明技术方法增加家蚕雌蛾产卵的数量，是没有增加蚕食桑量，通过调控家蚕能量代谢来实现的，这对于研究家蚕的物质能量代谢机制、进一步提高家蚕的制种数量和生理机能等，具有积极作用。

主权项

1.一种增加家蚕雌蛾产卵数量的技术方法，其特征在于：1)解剖并收集蚕蛹脂肪体，从中提取总RNA，然后逆转录获得第1链cDNA；2)以第1链cDNA为模板，通过逆转录聚合酶链式反应(RT‑PCR)扩增，克隆获得BmAKHR cDNA(家蚕脂动激素受体cDNA)；3)以BmAKHR cDNA为模板，通过PCR扩增得到BmAKHR DNA片段，琼脂糖凝胶电泳回收目的DNA片段，经HindIII/BamHI酶切后，与哺乳动物表达载体pFlag‑CMV‑3'连接，获得pFLAG‑BmAKHR；4)以pFLAG‑BmAKHR为模板，通过PCR扩增得到pFLAG‑BmAKHR DNA片段，琼脂糖凝胶电泳回收得到纯化的大小为781bp的目的DNA片段，作为反应模板；5)将反应模板与10×T7反应缓冲液、ATP液、CTP液、GTP液、UTP溶液、T7酶混合进行反应，然后进行多次处理得到BmAKHR siRNA；6)给五龄第2‑3天蚕腹部注射15‑25μg BmAKHR siRNA，用桑叶继续饲养至成熟结茧，并保护其化蛹化蛾后正常交配，产下的蚕卵数量增加。