[发明专利]一种多能干细胞诱导产生小胶质细胞的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种多能干细胞诱导产生小胶质细胞的方法及试剂盒。本发明首先提供了用于诱导产生小胶质细胞的试剂盒。本发明还提供了诱导产生小胶质细胞的方法。本发明诱导产生小胶质细胞方法及试剂盒经过初级造血祖细胞，成功将多能干细胞诱导为能产生大量具有特殊形态、表达特异性标志物和良好吞噬功能的成熟小胶质细胞，不需要共培养技术及基因重组技术，自多能干细胞获得成熟小胶质细胞仅需花费35‑40天，减少诱导时间并降低成本，方法简单、便利，使得研究小胶质细胞的基因功能、发掘小胶质细胞发育过程关键节点及新的治疗靶点成为可能，也为构建具有特定疾病防治功能的小胶质细胞提供了基础，为小胶质细胞的细胞替代疗法提供来源。

主权项

1.一种用于诱导产生小胶质细胞的试剂盒，其特征在于，包括培养基III、培养基IV、培养基V，培养基VI和培养基VII；所述培养基III为在HPC分化培养基中添加骨形态发生蛋白4、成纤维细胞生长因子‑2、激活素A、Y‑27632和氯化锂得到；其中，所述骨形态发生蛋白4在所述培养基III中的含量为50ng/ml；所述成纤维细胞生长因子‑2在所述培养基III中的含量为50ng/ml；所述激活素A在所述培养基III中的含量为12.5ng/ml；所述Y‑27632在所述培养基III中的含量为1μM；所述氯化锂在所述培养基III中的含量为2mM；所述培养基IV为在所述HPC分化培养基中添加血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子‑2得到；其中，所述血管内皮生长因子在所述培养基IV中的含量为50ng/ml；所述成纤维细胞生长因子‑2在所述培养基IV中的含量为50ng/ml；所述培养基V为在所述培养基IV中添加血小板生成素、白介素‑6、白介素‑3和干细胞因子得到；其中，所述血小板生成素在所述培养基V的含量为50ng/ml；所述白介素‑6在所述培养基V的含量为50ng/ml；所述白介素‑3在所述培养基V的含量为10ng/ml；所述干细胞因子在所述培养基V的含量为10ng/ml；所述培养基VI为在FACS缓冲液中添加人干细胞因子得到；其中，所述人干细胞因子在所述培养基VI的含量为10ng/ml；所述培养基VII为在MGL分化培养基中添加巨噬细胞集落刺激因子、转化生长因子β1、白介素‑34、人粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子和人FMS样的酪氨酸激酶3配体得到；其中，所述巨噬细胞集落刺激因子在所述培养基VII中的含量为25ng/ml；所述转化生长因子β1在所述培养基VII中的含量为50ng/ml；所述白介素‑34在所述培养基VII中的含量为100ng/ml；所述人粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子在所述培养基VII中的含量为50ng/ml；所述人FMS样的酪氨酸激酶3配体在所述培养基VII中的含量为25ng/ml。