[发明专利]一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法

摘要

本发明公开了一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法，将羽毛针禾的种子烘干去除颖果果皮，用无菌水冲洗；之后用乙醇水溶液浸泡，再用次氯酸钠浸泡并用无菌水冲洗；之后先在MS培养基或者诱导培养基中预培养，再用诱导培养基培养出愈伤组织，最后将愈伤组织扩大培养；诱导培养基配置。诱导培养基配置如下：以pH是5.8～6的MS为基础培养基，添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为1～2mg/L、酪蛋白水解产物45～55mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L，配制得到诱导培养基。扩大培养基配置如下：以pH是5.8～6的MS为基础培养基,添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为0.25～1mg/L、酪蛋白水解产物50～100mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L。

主权项

1.一种大量培养羽毛针禾愈伤组织的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将从野外收取的羽毛针禾的种子烘干后去除颖果果皮；(2)用离心管，在无菌操作台上用无菌水冲洗4～5次；(3)用体积浓度75％的乙醇水溶液浸泡60～120s，期间摇晃离心管10～50次，之后用无菌水冲洗4～5次；(4)再用体积浓度10％的次氯酸钠浸泡8～12min，期间摇晃离心管10～50次，之后用无菌水冲洗6～8次；(5)继续在无菌台内，将步骤(4)获得的种子均匀摆放到有pH是5.8～6的MS培养基或者是有诱导培养基的平板内，在27～29℃黑暗预培养3～7天；所述诱导培养基使用以下方法制备：以pH是5.8～6的MS为基础培养基，添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为1～2mg/L、酪蛋白水解产物45～55mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L，配制得到诱导培养基；(6)在无菌台内，将步骤(5)中预培养得到的种子用剪刀剪碎，或者使用涂布器下端在2ml离心管中碾压，得到种子碎片，后将碎片移至诱导培养基中，在27～29℃暗培养，至长出愈伤组织；所述诱导培养基使用以下方法制备：以pH是5.8～6的MS为基础培养基，添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为1～2mg/L、酪蛋白水解产物45～55mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L，配制得到诱导培养基；(7)挑取步骤(6)得到的愈伤组织并放入扩大培养基中继续培养，得到大量羽毛针禾愈伤组织，所述扩大培养基通过以下方法制备：以pH是5.8～6的MS为基础培养基,添加2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)的浓度为0.25～1mg/L、酪蛋白水解产物50～100mg/L，琼脂粉的浓度为6.5～8g/L、蔗糖的浓度为25‑30g/L。