[发明专利]核酸内切酶SpCas9高特异性截短变异体TSpCas9-V1/V2及其应用

摘要

本发明属于蛋白质工程技术领域，具体为一种来源于酿脓链球菌的CRISPR核酸酶SpCas9的截短型高特异性变异体及其应用。本发明中的CRISPR‑Cas9（TSpCas9‑V1/V2）核酸酶属于CRISPR‑Cas9系统，TSpCas9‑V1核酸酶将截短型CRISPR‑Cas9（TSpCas9）核酸酶的第863位的氨基酸H突变成N，TSpCas9‑V2核酸酶将截短型CRISPR‑Cas9（TSpCas9）核酸酶的第862位的氨基酸H突变成A，将第863位的氨基酸H突变成N；该截短型高特异性变异体具有与野生型CRISPR‑Cas9核酸酶相当的基因编辑活性，能够降低基因编辑中的脱靶，因而能用于对基因组DNA片段特定位置的精准编辑。

主权项

1.来源于酿脓链球菌的CRISPR‑Cas9核酸酶SpCas9的截短型高特异性变异体，其特征在于，有两种，一种是将截短型CRISPR‑Cas9（TSpCas9）核酸酶的第863位的氨基酸H突变成N，记为TSpCas9‑V1核酸酶；一种是将截短型CRISPR‑Cas9（TSpCas9）核酸酶的第862位的氨基酸H突变成A，第863位的氨基酸H突变成N，记为TSpCas9‑V2核酸酶；两种截短型高特异性变异体记为TSpCas9‑V1/V2；它们具有与野生型CRISPR‑Cas9核酸酶相当的基因编辑活性，但比野生型特异性更高，能实现精准编辑。