[发明专利]一种许氏平鲉精液超低温冷冻保存方法

摘要

本发明公开了一种许氏平鲉精液超低温冷冻保存方法，包括许氏平鲉精液采集及活力检测、精液稀释液配制、冷冻保护液配制、精液与冷冻保护液混合、平衡和冷冻保存、解冻及精液活力检测。本发明的意义是可以将当年的成熟精液冷冻保存起来备用，或者从其他地方冷冻保存许氏平鲉的精液，运送到育苗场，减少生产成本；同时也为人工选育技术或与其他鱼类进行杂交受精提供技术支撑。

主权项

1.一种许氏平鲉精液超低温冷冻保存方法，其特征在于按照以下步骤进行：1)许氏平鲉精液采集及活力检测：解剖性成熟的许氏平鲉雄鱼获得精巢，用镊子挤压精巢及输精管，沾取精液于激活液中激活后，立即在光学显微镜下观察精子活力，将精子活力达90％以上的精液用于超低温冷冻保存；2)精液稀释液配制：在每升蒸馏水中加入氯化钠3.775g、葡萄糖10g、牛血清蛋白10g、土霉素5g，渗透压约为300mOsmol/kg；pH约为7.7；3)冷冻保护液配制：在精液稀释液中加入10％的二甲基亚砜(DMSO)，并放入4℃备用；4)精液与冷冻保护液混合：取精液5μL与冷冻保护液以1:20‑1:25的比例混合装入冻存管中，漩涡震荡混匀；5)平衡和冷冻保存：将装有混合液的冻存管在4℃平衡20min，置液氮面上方10cm，平衡12min，液氮面平衡6min后，投入液氮中冷冻保存；或采用程序降温仪降温冷冻保存：将装有混合液的冻存管在4℃平衡20min，以25℃/min的冷冻速率由4℃降温至‑80℃，在‑80℃平衡5min，以20℃/min的降温速率降至‑180℃，由程序冷冻仪取出后直接投入液氮罐保存；6)解冻及精液活力检测：冷冻保存的精液于37℃水浴中解冻20s，取5μL混合液用激活液激活置光学显微镜下观察精子活力。