[发明专利]一种抗除草剂薏苡资源获取的方法

摘要

本发明公开了一种抗除草剂薏苡资源获取的方法，包括以下步骤：（1）无菌胚芽培养；（2）愈伤组织诱导；（3）愈伤组织增殖培养；（4）抗草丁膦bar基因导入愈伤组织共培养；（5）抗性愈伤组织的增殖培养；（6）草丁膦培养筛选抗性愈伤组织；（7）抗草丁膦胚性愈伤组织的再分化；（8）炼苗移栽。通过多步科学精确的培养筛选，能够高效获得抗除草剂薏苡资源，其对抗除草剂具有较强的抗性，可较好的解除除草剂应用的顾忌，在薏苡种植过程中能够简化除草过程，提高劳动效率，增加经济产值，具有较好的推广使用价值。

主权项

1.一种抗除草剂薏苡资源获取的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌胚芽培养：去除总苞的薏苡种子经75%酒精浸泡2min，无菌水冲洗3次，无菌水纸床培养，发芽后0.1%升汞消毒8min，无菌水冲洗5‑8次，切下胚芽，接于MS培养基无菌培养，温度21‑23℃，光照强度2000lx；（2）愈伤组织诱导：芽长达3cm后，斜切薄片，转接于培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，1200lx，出愈后原培养基继代2‑3次；（3）愈伤组织增殖培养：继代2‑3次后，接入培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2‑3次；（4）抗草丁膦bar基因导入愈伤组织共培养：将含有bar基因载体的农杆菌菌液培养过夜，用菌液稀释培养基，稀释光密度值至0.6‑0.8，侵染薏苡的胚性愈伤组织15min，期间不停晃动，之后用滤纸吸干愈伤组织上多余的菌液，接入培养基上暗培养2d，培养后的胚性愈伤组织用含有500mg/L头孢霉素的无菌水洗2次，用滤纸吸干水分；（5）抗性愈伤组织的增殖培养：接入培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2‑3次；（6）草丁膦培养筛选抗性愈伤组织：增殖后的愈伤组织转接抗性选择培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，1500lx，筛选培养，筛选3次，每15d继代1次，3轮选择后生长健旺的抗性愈伤组织，进行编号；（7）抗草丁膦胚性愈伤组织的再分化：编号后抗性愈伤组织转接分化培养基进行分化培养，同时提取抗性愈伤组织系的DNA，进行聚合酶链式反应（PCR）检测，统计转化率，胚性愈伤组织出现的绿点进一步分化出不定芽，待不定芽长到2‑3cm，转接在生根培养基（1/2N₆）上，2%蔗糖，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，2000lx进行生根培养；（8）炼苗移栽：苗长到6‑7cm，选根系诱导较好的苗开瓶炼苗5‑7d，多菌灵液蘸根后移栽于基质中，1/8N₆培养液喷施，逐天减湿炼苗，2周后移到温室内，成活后再移至大田正常栽培管理，收种，次年播种，喷施草丁膦检验转化效果，留用适用资源。