[发明专利]一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法

摘要

本发明公开了一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，荧光探针1，5‑MQDA的制备方法操作步骤如下所示：将单取代或未取代的1，5‑萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6‑（3‑吗啉‑1‑丙炔）喹啉‑2‑甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物。本发明通过采用基于1，5‑二氨基萘单元作为反应识别基团，该探针能利用双光子激发技术以荧光方法实现高选择性地检测细胞内溶酶体中次氯酸根阴离子含量，继而解决了现有检测分析方法不具有高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间分辨率高的问题。

主权项

1.一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其特征在于：检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5‑MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1‑C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；荧光探针1，5‑MQDA的制备路线如下所示：荧光探针1，5‑MQDA的制备方法操作步骤如下所示：将单取代或未取代的1，5‑萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6‑（3‑吗啉‑1‑丙炔）喹啉‑2‑甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5‑MQDA；熔点：241.9‑242.6℃，IR（film，cm^‑1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，760.0，731.0，¹HNMR（CDCl₃，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J₁=1.6Hz，J₂=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=8.7Hz，1H），¹³CNMR（CDCl₃，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C₂₇H₂₆N₄O，理论值C：76.75，H：6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI‑MS：C₂₇H₂₆N₄O，m/z：423.21（M+1）。