[发明专利]一种检测KRAS基因12密码子6种热点突变的引物、探针、检测体系和试剂盒及方法有效
| 申请号： | 201910603130.7 | 申请日： | 2019-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN110452983B | 公开（公告）日： | 2022-09-20 |
| 发明（设计）人： | 贾洪涛;许卫东;焦峰;王志强;顾国生;杜梅;党金龙 | 申请（专利权）人： | 凯威康达(厦门)生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京瑞华腾知识产权代理事务所(普通合伙) 32368 | 代理人： | 钱丽 |
| 地址： | 361000 福建省厦门市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，尤其是一种检测KRAS基因12密码子6种热点突变的引物、探针、检测体系和试剂盒及方法；包括引物、探针和PNA，所述引物包括内参β‑actin基因上游引物F1、下游引物F2和KRAS基因扩增上游引物F3、下游引物F4；所述探针包括两组，第一组包括内参β‑actin探针P1和检测探针P2、P3、P4；第二组包括内参探针P1和检测探针P5、P6、P7探针；本发明中利用荧光PCR方法和Taqman核心技术设计检测试剂盒，操作简单，技术先进，检测的灵敏度更高、特异性、重复性、稳定性好；适用于临床医生在做胰腺癌、甲状腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌等患者的肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)治疗和多肽疫苗治疗的伴随诊断。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 kras 基因 12 密码子 热点 突变 引物 探针 体系 试剂盒 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测KRAS基因12密码子6种热点突变的引物和探针，其特征在于：包括引物、探针和PNA，所述引物包括内参β-actin基因上游引物F1、下游引物F2和KRAS基因扩增上游引物F3、下游引物F4：/n上游引物F1：5’-GAATTGGCGCTAATTGCGCTG-3’，/n下游引物F2：5’-AAGGACAAGAAGCCCTGAGCAC-3’，/n上游引物F3：5’-AGGCCTGCTGAAAATGACTG-3’，/n下游引物F4：5’-TGTTGGATCATATTCGTCCAC-3’，/n所述PNA是抑制野生型KRAS基因12密码子扩增的PNA：/nPNA序列：NH2-TGGAGCTGGTGGCGT-COOH；/n所述探针包括两组，第一组包括内参β-actin探针P1和检测探针P2、P3、P4；第二组包括内参探针P1和检测探针P5、P6、P7探针；探针及其标记物如下：/n第一组探针混合物：/n探针P1：5’-GCCTCCGACCAGTGTTTGCC-3’、β-actin(FAM)，/n探针P2：5’-TGGAGCTGATGGCGT-3’、G12D(VIC)，/n探针P3：5’-TGGAGCTGTTGGCGT-3’、G12V(ROX)，/n探针P4：5’-TGGAGCTCGTGGCGT-3’、G12R(CY5)，/n第二组探针混合物：/n探针P1：5’-GCCTCCGACCAGTGTTTGCC-3’、β-actin(FAM)，/n探针P5：5’-TGGAGCTGCTGGCGT-3’、G12A(VIC)，/n探针P6：5’-TGGAGCTAGTGGCGT-3’、G12S(ROX)，/n探针P7：5’-TGGAGCTTGTGGCGT-3’、G12C(CY5)。/n
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