[发明专利]一种耳聋模型猪的重构卵及其构建方法，耳聋模型猪、构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201910603387.2 | 申请日： | 2019-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN110468154A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 曹新;姚俊;曾华沙;杨海元;王盈;邢光前;陈智斌;魏钦俊;鲁雅洁;戴一凡 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学;江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院) |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N9/22;C12N15/877;C12N5/10;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 32237 江苏圣典律师事务所 | 代理人： | 胡建华<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种耳聋模型猪的重构卵及其构建方法，并公开了了一种耳聋模型猪、构建方法及其应用。本发明的耳聋模型猪的重构卵及其构建方法和模型猪的构建方法通过敲除猪OSBPL2基因获得了耳聋小型猪的重构卵，结合CRISPR/Cas9基因编辑技术、体细胞核移植技术和胚胎移植技术，证明该方法用于构建基因修饰的耳聋猪模型的高效性与可行性。通过该方法可以精确复制人OSBPL2基因突变的基因型和耳聋表型，获得的OSBPL2基因敲除猪具有典型的人类常染色显性遗传性耳聋(DFNA67)的特征，可为人类遗传性耳聋的疾病研究提供可靠的大动物模型，并可应用于内耳的基因修复、内耳毛细胞再生与听力重建等。 | ||
| 搜索关键词： | 耳聋 构建 重构 内耳 体细胞核移植技术 人类遗传性耳聋 胚胎移植技术 遗传性耳聋 基因敲除 基因突变 基因修复 基因修饰 疾病研究 听力重建 细胞再生 大动物 高效性 基因型 小型猪 基因 染色 表型 敲除 应用 复制 | ||
【主权项】：
1.一种耳聋模型猪的重构卵的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)针对猪物种的OSBPL2基因的OSBP指纹基序编码序列及其上游编码序列设计gRNA识别序列，所述OSBPL2基因的OSBP指纹基序编码的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示，所述OSBP指纹基序编码序列核苷酸序列如SEQ ID No:2所示，所述OSBP指纹基序编码序列及其上游编码序列如SEQ ID No:3所示；/n(2)对所述gRNA识别序列设计互补序列，以构建含有该gRNA识别序列的双链DNA；/n(3)构建含Cas9骨架以及步骤(2)中所述双链DNA的gRNA表达载体；/n(4)将步骤(3)中所述gRNA表达载体转染猪胎儿成纤维细胞，筛选出OSBPL2基因敲除的阳性克隆细胞；/n(5)将步骤(4)筛选得到的阳性克隆细胞注入母猪的去核卵母细胞，形成重构卵。/n
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