[发明专利]一种六氟异丙醇预处理辅助酶法降解几丁质生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法

摘要

本发明公开了一种六氟异丙醇预处理辅助酶法降解几丁质生产N‑乙酰氨基葡萄糖的方法。该方法通过六氟异丙醇溶剂对几丁质进行预处理，并对处理后的几丁质粉末洗涤后，再与几丁质粗酶液混合，最后通过降解反应得到N‑乙酰氨基葡萄糖。本发明利用六氟异丙醇预处理几丁质可以大大提高几丁质酶降解效率，短时间得到大量N‑乙酰氨基葡萄糖。本发明使用的六氟异丙醇溶剂沸点低，易回收，对环境友好，同时处理温度较低，具有显著的经济效益，应用前景广阔。

主权项

1.一种六氟异丙醇预处理辅助酶法降解几丁质生产N‑乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，微生物发酵产几丁质酶，并获得浓缩酶液将Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC‑H1 菌株接种到种子液培养基中，37℃、200rpm 下培养 12 h，再以体积分数 5% 的接种量接入装有产酶发酵培养基的摇瓶中，在温度为 26℃，转速为 200rpm，初始 pH7.5 下发酵 72 h 后收集发酵液；将获得的发酵液在4℃离心机中8000g离心，分离菌体，收集上清液，得到几丁质粗酶液，将粗酶液在旋转蒸发仪上抽真空浓缩，浓缩2‑3h，得浓缩酶液；步骤2，六氟异丙醇对几丁质进行预处理将粒径为20‑100目的几丁质粉末与体积浓度为50‑100%的六氟异丙醇混合后，恒温加热至60‑80℃，加热时间10‑120分钟；步骤3，预处理后的洗涤对经预处理后的几丁质粉末中加入纯化水，6000‑12000rpm的转速下离心处理后倒去上清，重复离心操作3‑4次，再向几丁质沉淀中加入纯水得几丁质悬浮液；步骤4，几丁质酶降解预处理后的几丁质将几丁质悬浮液中加入浓缩酶液，恒温水浴锅中37℃下反应30‑120min后，再按照1:1的添加量加入二硝基水杨酸（DNS），沸水煮5min，冷却后观察体系颜色变化，12000rpm离心2min并测定其还原糖的含量。