[发明专利]一种饲料中两歧双歧杆菌的鉴定方法在审
| 申请号： | 201910607258.0 | 申请日： | 2019-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN110229920A | 公开（公告）日： | 2019-09-13 |
| 发明（设计）人： | 韩涛;高宇;傅德江;张雅薇;林碧莲;张芳;李颖 | 申请（专利权）人： | 福建省产品质量检验研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 350000 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种饲料中两歧双歧杆菌的鉴定方法，所述方法是应用特异性引物及荧光探针对两歧双歧杆菌的分子特征进行识别，所述引物及荧光探针序列为：上游引物：5’‑CCACATGATCGCATGTGATTG‑3’；下游引物：5’‑CCGAAGGCTTGCTCCCAAA‑3’；荧光探针：5’‑CCTCCATCCCTCACGC‑3’；所述荧光探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。本发明方法能够快速、准确地鉴定两歧双歧杆菌。 | ||
| 搜索关键词： | 两歧双歧杆菌 荧光探针 标记荧光 特异性引物 淬灭基团 分子特征 上游引物 下游引物 饲料 引物 荧光 应用 | ||
【主权项】：
1.一种饲料中两歧双歧杆菌的鉴定方法，其特征在于， 所述的方法是应用特异性引物及荧光探针对两歧双歧杆菌的分子特征进行识别，所述引物及荧光探针的序列为：上游引物：5’‑CCACATGATCGCATGTGATTG‑3’；下游引物：5’‑CCGAAGGCTTGCTCCCAAA‑3’；荧光探针：5’‑CCTCCATCCCTCACGC‑3’；所述荧光探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团;实时荧光PCR反应体系总体积为25 μL，其中2×TaqMan PCR Master Mix：12.5 μL，上游引物：0.5 μL，下游引物：0.5 μL，荧光探针：0.5 μL，浓度为10 ng/μL的DNA模板：1 μL，无菌去离子水：10 μL;实时荧光PCR反应的程序为：95 ℃预变性5 min；95 ℃、30 s，71 ℃、60 s，45个循环；在每个循环的71 ℃退火并延伸阶段收集荧光信号;所述实时荧光PCR反应结束后根据扩增曲线判定结果，判定方法如下：在空白对照及阴性对照无Ct值且无扩增曲线条件下，若待测DNA模板出现典型扩增曲线，且Ct值小于或等于36时，判定为两歧双歧杆菌；若Ct值大于或等于40时，判定为非两歧双歧杆菌；若Ct值大于36且小于40时，应重新进行测试；重新测试的Ct值大于或等于40时，判定为非两歧双歧杆菌，重新测试的Ct值小于40时，则判定为两歧双歧杆菌。
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