[发明专利]体外筛选环状核酸适配体的方法在审
| 申请号： | 201910607482.X | 申请日： | 2019-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN110305860A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 郑磊;毛瑜 | 申请（专利权）人： | 合肥工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京思创大成知识产权代理有限公司 11614 | 代理人： | 高爽 |
| 地址： | 230002 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，涉及一种体外筛选环状核酸适配体的方法，包括以下步骤：将环状DNA分子文库与磁珠共同孵育，获得待筛选的环状DNA分子文库；将待筛选的环状DNA分子文库、表面修饰有靶标分子的磁珠、以及所述靶标分子所在的生物体系共同孵育；分离并收集筛选后的环状DNA分子文库；进行滚环扩增反应，酶切，形成第一组链状单体；进行自连接，形成环状DNA分子，进行分离和纯化，获得与筛选后环状DNA分子文库互补的环状DNA分子文库；进行滚环扩增反应，进行酶切，形成第二组链状单体；自连接，形成环状DNA分子，分离和纯化，获得扩增的环状DNA分子文库；重复进行步骤S1～S7。该方法能制备高稳定性、高特异性和高亲和力的环状核酸适配体。 | ||
| 搜索关键词： | 环状DNA分子 文库 筛选 环状核酸 适配体 分离和纯化 靶标分子 滚环扩增 磁珠 孵育 酶切 组链 生物技术领域 表面修饰 高亲和力 高稳定性 生物体系 体外筛选 扩增 制备 种体 重复 | ||
【主权项】：
1.一种体外筛选环状核酸适配体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1.将环状DNA分子文库与磁珠共同孵育，去除非特异性吸附在磁珠上的环状DNA分子，获得待筛选的环状DNA分子文库；S2.将步骤S1获得的所述待筛选的环状DNA分子文库、表面修饰有靶标分子的磁珠、以及所述靶标分子所在的生物体系共同孵育；S3.分离并收集步骤S2中与所述磁珠结合的环状DNA分子，得到筛后环状DNA分子文库；S4.以步骤S3收集的所述筛后环状DNA分子文库为模板进行第一次滚环扩增反应，之后将所述第一次滚环扩增反应的产物进行限制性酶切，形成第一组链状单体；S5.将所述第一组链状单体进行自连接，形成环状DNA分子，之后进行分离和纯化，获得与筛选后的环状DNA分子文库互补的环状DNA分子文库；S6.以S5得到的环状DNA分子文库为模板进行第二次滚环扩增反应，之后将所述第二次滚环扩增反应的产物进行限制性酶切，形成第二组链状单体；S7.将所述第二组链状单体进行自连接，形成环状DNA分子，之后进行分离和纯化，获得筛选后扩增的环状DNA分子文库；S8.针对步骤S7得到的环状DNA分子文库重复进行步骤S1～S7。
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