[发明专利]一种快速获得茄子转基因植株的方法

摘要

本发明涉及一种快速获得茄子转基因植株的方法，属于转基因植株获取方法技术领域。为解决茄子遗传转化效率低的问题，本发明提供了一种快速获得茄子转基因植株的方法，先在再生培养基上预培养茄子外植体，对携带cryIIIA基因的农杆菌进行活化，以农杆菌菌液侵染茄子外植体，经侵染的外植体在再生培养基上培养，使农杆菌能够转化外植体细胞；再将外植体转移到选择培养基上继续培养，使外植体形成不定芽，进而形成完整植株。本发明再生培养基和选择培养基中均含有噻苯隆和N⁶‑[异戊烯]‑腺嘌呤；其诱导效率高，可提高外植体形成不定芽的个数，再生效率的增长率可达到163％。本发明提高了转基因茄子育种的转化效率，缩短了转化周期。

主权项

1.一种快速获得茄子转基因植株的方法，其特征在于，步骤如下：步骤一、在再生培养基上预培养茄子外植体，所述再生培养基中含有0.1～0.5μg/mL噻苯隆和10～15μg/mLN⁶‑[异戊烯]‑腺嘌呤；步骤二、农杆菌活化：准备一株携带有重组DNA的农杆菌，其重组DNA为cryIIIA基因和可选择标记基因，该标记基因对重组DNA转化的细胞具有卡那霉素抗性，将这株农杆菌接种于含有卡那霉素的YEB固体培养基上，一定温度下进行暗培养至长出农杆菌单菌落，挑单菌落接种于含有卡那霉素的YEB液体培养基中，一定温度下进行振荡培养，将振荡培养所得菌液转入离心管中，4000r/min离心，收集菌体后用等体积的无菌水悬浮菌液，得到农杆菌菌悬液待用；步骤三、农杆菌侵染：将步骤一完成预培养的茄子外植体浸入步骤二备好的农杆菌菌悬液中，浸没10分钟完成农杆菌的侵染；步骤四、将步骤三经农杆菌侵染过的茄子外植体置于再生培养基上培养，使农杆菌能够转化茄子外植体细胞；步骤五、将经过再生培养基培养的茄子外植体转移到选择培养基上继续培养，使外植体形成不定芽，进而形成根、芽、叶俱全的，携带cryⅢA基因的抗鞘翅目昆虫的转基因茄子完整植株。