[发明专利]一种具有靶向光热效应的智能响应性纳米粒子的制备方法

摘要

本发明涉及医用材料领域，公开了一种具有靶向光热效应的智能响应性纳米粒子的制备方法，本发明首先使用羧基化胆固醇和蛋黄卵磷脂制备得到具有pH敏感的脂质体膜；然后以脂质体膜为聚合模板，温度敏感的异丙基丙烯酰胺为单体，N，N‑亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，通过模板原位聚合方法制备出一种新型的pH和温度双敏感的纳米药物递送载体；然后再将氧化石墨烯与叶酸、1‑乙基‑(3‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺、氮‑羟基琥珀酰亚胺反应得到叶酸@石墨烯；最后再将叶酸@石墨烯负载于脂质体凝胶上，得到最终产物。该方法制备的脂质体凝胶将在后期可实现靶向性、肿瘤热疗和化疗的协同效应，增加聚合物材料的稳定性，有望用于癌细胞治疗。

主权项

1.一种具有靶向光热效应的智能响应性纳米粒子的制备方法，其特征在于：以μmol、mmol、mL、mg和g计，包括以下步骤：1)取40～50μmol蛋黄卵磷脂和13～15μmol胆固醇琥珀酸单酯，用2～4mL三氯甲烷溶解，采用旋转蒸发法将溶剂除去，得到一层无色透亮的薄膜，真空干燥，得到干燥脂质体膜；2)取500～550mg异丙基丙烯酰胺，50～55mg N，N‑亚甲基双丙烯酰胺，5～8mg偶氮二异丁脒盐酸盐和260～280mmol硫酸铵，用5～8mL去离子水溶解，配制成水凝胶预聚物水溶液；3)通过手摇法使步骤1)所得干燥脂质体膜脱落溶解到步骤2)所得水凝胶预聚物水溶液中，在冰水浴下超声处理，形成由脂质体囊泡和纳米凝胶预聚物水溶液组成的混合溶液；4)在步骤3)所得混合溶液中加入抗坏血酸50～70mg，抽真空后通入氮气，重复3～5次；转移至氮气氛围的密封反应装置中，于45～50℃水浴中反应70～90min，并将反应后的溶液置于透析袋中透析去除未反应的杂质；5)先后用200nm、100nm孔径大小的脂质体挤出器挤出透析所得溶液，得到双敏感脂质体纳米凝胶溶液；6)取50～60mg氧化石墨烯加入50～60mL蒸馏水，在冰浴条件下超声振荡使氧化石墨片层剥落，获得棕黄色的分散液，将分散液在1000～12000r/min下离心15～25min，收集棕黄色上清液，将沉淀再次加入蒸馏水中，重复上述步骤，合并上清液得到氧化石墨烯水溶液；7)将步骤6)所得氧化石墨烯水溶液，用蒸馏水进行透析，取滤液即为纯化后的氧化石墨烯分散液；8)将步骤7)所得氧化石墨烯分散液，超声分散均匀，加入5～7g氢氧化钠、5～7g次氯酸钠，超声浴1～3h，将氧化石墨烯片层上的羟基转化为羧基；反应完全后，用稀盐酸中和并反复漂洗，经过离心处理，收集上层的黑色溶液，并用去离子水透析40～50h，除去未反应的水溶性物质；9)向步骤8)所得溶液中加入0.5～0.8g叶酸，超声分散均匀，边搅拌边加入125～127mg 1‑乙基‑(3‑二甲氨基丙基)碳化二亚胺和182.5～184.5mg氮‑羟基琥珀酰亚胺，超声2～3h后用pH＝7.8‑8.2的碳酸氢钠溶液进行透析处理，每3‑5h换一次水，40～50h后完成透析，得到黑色溶液；10)采用旋转蒸发法去除黑色溶液中的水分，用丙酮反复洗涤，真空干燥，得到叶酸修饰的氧化石墨烯；11)将步骤10)所得叶酸修饰的氧化石墨烯与步骤5)所得双敏感脂质体纳米凝胶溶液共混，避光搅拌8～12h，离心洗涤、冷冻干燥，得到最终产物。