[发明专利]同时表达兔病毒性出血症病毒经典型及二型衣壳蛋白的杆状病毒及其制备和应用在审
| 申请号： | 201910625467.8 | 申请日： | 2019-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN110423779A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 刘光清;戚睿斌;缪秋红;朱杰;李传峰;陈宗艳 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N7/01;C12N15/85;A61K39/23;A61P31/20 |
| 代理公司： | 上海段和段律师事务所 31334 | 代理人： | 李慧;郭国中 |
| 地址： | 201100 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种同时表达兔病毒性出血症病毒经典型及二型衣壳蛋白的杆状病毒及其制备和应用，所述病毒采用以下方法制备：A、分别扩增classic RHDV和RHDV2的VP60基因；B、将步骤A得到的VP60基因分别与pEASY‑Vector连接，转化培养后得质粒；C、将步骤B得到的质粒的VP60基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体中，转化感受态细胞，得重组穿梭质粒；D、将步骤C得到的重组穿梭质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞，即得。采用该杆状病毒制备的预防兔病毒性出血症经典型及二型的二价亚单位疫苗可以产生高水平的VP60特异性抗体且抗体具有良好的中和病毒能力，IL‑4和IFN‑γ细胞因子水平也显著上升。 | ||
| 搜索关键词： | 杆状病毒 兔病毒性出血症病毒 重组穿梭质粒 制备和应用 衣壳蛋白 质粒 制备 昆虫杆状病毒表达 兔病毒性出血症 细胞因子水平 转染昆虫细胞 感受态细胞 特异性抗体 亚单位疫苗 脂质体介导 中和病毒 二价 抗体 扩增 转化 克隆 病毒 预防 | ||
【主权项】：
1.一种同时表达兔病毒性出血症病毒经典型及二型衣壳蛋白的杆状病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、分别扩增classic RHDV和RHDV2的VP60基因；B、将步骤A得到的classic RHDV和RHDV2的VP60基因分别与pEASY‑Vector连接，转化培养后得质粒pEASY‑classic RHDV‑VP60、pEASY‑RHDV2‑VP60；C、将步骤B得到的两种质粒的VP60基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体中，然后转化感受态细胞，得重组穿梭质粒；D、将步骤C得到的重组穿梭质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞，即得所述同时表达兔病毒性出血症病毒经典型及二型衣壳蛋白的杆状病毒。
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