[发明专利]同时检测人末梢血中25-羟基维生素D3和25-羟基维生素D2含量的方法

摘要

本发明提供了同时检测人末梢血中25‑羟基维生素D3和25‑羟基维生素D2含量的方法，该方法为：利用高效液相串联质谱仪检测至少三个标准溶液得到相应色谱图，标准溶液中含浓度已知的两维生素及各自的内标物；根据标准溶液中维生素与其内标物的浓度比值、色谱图中两者的峰面积比值，拟合出各个维生素的标准曲线方程；处理待检测末梢血液得到血液样品，并加入浓度已知的两种内标物，经样品前处理以得到待测样品；在相同检测条件下检测待测样品得到其色谱图；将该色谱图中维生素及其内标物的峰面积比值代入到相应标准曲线方程，并根据所添加的其内标物的浓度，计算待检测血液中各个维生素的含量。本发明能够同时检测人末梢血中两维生素的含量。

主权项

1.同时检测人末梢血中25‑羟基维生素D3和25‑羟基维生素D2含量的方法，其特征在于，包括：利用高效液相串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的25‑羟基维生素D3及其内标物和25‑羟基维生素D2及其内标物，不同标准溶液中同一维生素的浓度不同；以标准溶液中，一维生素的浓度与其内标物的浓度的比值为一二维坐标，以及以该标准溶液的色谱图中，该维生素的峰面积与其内标物的峰面积的比值为另一二维坐标，拟合得到该维生素的标准曲线方程，从而得到25‑羟基维生素D3的标准曲线方程和25‑羟基维生素D2的标准曲线方程；处理待检测末梢血液得到血液样品；将一定量的混合内标工作液添加到所述血液样品中，并进行样品前处理以得到待测样品，其中，所述混合内标工作液中含有浓度已知的25‑羟基维生素D3的内标物和25‑羟基维生素D2的内标物；利用高效液相串联质谱仪，在相同检测条件下，检测所述待测样品，得到所述待测样品的色谱图；将所述待测样品的色谱图中，一维生素的峰面积与其内标物的峰面积的比值，代入到该维生素的标准曲线方程中，并根据所添加的其内标物的浓度，计算出所述待检测末梢血液中该维生素的含量，从而得到所述待检测末梢血液中25‑羟基维生素D3的含量和25‑羟基维生素D2的含量；其中，维生素的标准曲线方程为：y＝k×x+b，其中，y表征峰面积比值，x表征浓度比值，k和b均表征系数。