[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9技术的氨糖合酶产生菌、构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201910633205.6 | 申请日： | 2019-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN110387345A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 史劲松;龚劲松;李晓鹏;许正宏;李会;张超;丁振中 | 申请（专利权）人： | 扬州日兴生物科技股份有限公司;江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/90;C12P19/26;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 朱进 |
| 地址： | 225600 江苏省扬*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9技术的氨糖合酶产生菌、构建方法及其应用，该氨糖合酶产生菌是将氨基葡萄糖乙酰化酶基因gnal和氨基葡萄糖合酶基因glms连接到载体pET‑28a上，再将重组质粒转入CRISPR‑Cas9基因编辑技术敲除E.coli BL21(DE3)基因组氨基葡萄糖代谢基因naggE和mannX得到的双基因缺失宿主菌中获得的。该重组菌应用于发酵培养，在摇瓶上可以累积氨基葡萄糖7.51g/L，乙酰氨基葡萄糖3.73g/L，总产量为11.24g/L；在5L发酵罐上可以累积氨基葡萄糖7.30g/L，乙酰氨基葡萄糖10.53g/L，总产量为17.83g/L。 | ||
| 搜索关键词： | 氨基葡萄糖 产生菌 氨糖 合酶 乙酰氨基葡萄糖 构建 氨基葡萄糖乙酰化酶 应用 双基因缺失 代谢基因 发酵培养 合酶基因 重组质粒 基因 发酵罐 基因组 宿主菌 重组菌 敲除 摇瓶 转入 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR‑Cas9技术的氨糖合酶产生菌，其特征在于，所述氨糖合酶产生菌是应用CRISPR‑Cas9基因编辑技术敲除E.coli BL21(DE3)基因组氨基葡萄糖代谢基因naggE和mannX得到双基因缺失宿主菌E.coli BL21ΔmannXΔ naggE，并导入SEQ ID NO.1所示的氨基葡萄糖乙酰化酶基因gnal和SEQ ID NO.2所示的氨基葡萄糖合酶基因glms获得的。
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