[发明专利]靶向PD-L1载miR-34a微泡的制备方法及在制备抑制宫颈癌的药物上的应用

摘要

本发明涉及一种超声联合靶向PD‑L1载miR‑34a微泡的制备方法，具体是将生物素化脂质微泡与链酶亲和素孵育，加入生物素化的PD‑L1抗体，经孵育后离心得到靶向PD‑L1微泡。将所得的靶向PD‑L1微泡和miR‑34a质粒室温下孵育，再用PBS冲洗，离心，除去未结合在微泡表面的miR‑34a质粒，得到靶向PD‑L1载miR‑34a微泡。本发明将靶向PD‑L1载miR‑34a微泡应用于制备抑制宫颈癌移植瘤的药物上，结果表明靶向PD‑L1载miR‑34a微泡具体更高的抑瘤效果，靶向PD‑L1载miR‑34a微泡的体积抑制率和体重抑制率分别为54.32%和60.14%。

主权项

1.靶向PD‑L1载miR‑34a微泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000‑生物素、硬脂酸—聚乙酰亚胺混于玻璃试管中，50‑60℃水浴锅预热后，涡旋状态下充入氮气使混合液成膜于试管壁；（2）将步骤（1）中成膜后的玻璃管抽真空后，加入Tris缓冲液，水浴超声后置于西林瓶中密封，冲入C₃F₈气体，冷藏保存；（3）将步骤（2）中冷藏后的西林瓶经振荡后得到白色乳状液体；将该白色乳状液体移经离心后弃去下层液体即为生物素化脂质微泡；（4）向步骤（3）中生物素化脂质微泡中滴加链酶亲和素，在2‑4 °C、避光下恒温振荡孵育，得到微泡混悬液；（5）将步骤（4）中的微泡混悬液离心后，弃去下清液后，采用PBS缓冲液漂洗、离心、弃下清，得到微泡；（6）将生物素化的PD‑L1抗体加入步骤（5）的微泡中，在2‑4 °C、避光的恒温振荡孵育过夜后离心，弃下清液，加入PBS缓冲液漂洗、离心、弃下清，即可得到靶向PD‑L1微泡；（7）将步骤（6）所得的靶向PD‑L1微泡和miR‑34a质粒室温下孵育，再用 PBS冲洗，离心，除去未结合在微泡表面的miR‑34a质粒，得到靶向PD‑L1载miR‑34a微泡。