[发明专利]一种利用固定化漆酶催化降解异黄酮的方法

摘要

本发明提供一种利用固定化漆酶催化降解异黄酮的方法，以来源于一色齿毛菌（Cerrena unicolor）HYB07菌株的漆酶为对象，采用丙烯酰基改性磁性微球Fe₃O₄‑SiO₂‑MPS为载体对漆酶进行固定化，利用固定化漆酶降解大豆异黄酮。本发明采用丙烯酰基改性磁性微球Fe₃O₄‑SiO₂‑MPS为载体固定漆酶，改善漆酶的酶学性质；利用固定化漆酶高效降解大豆异黄酮，实现漆酶在异黄酮类环境激素降解中的应用。

主权项

1.一种利用固定化漆酶催化降解异黄酮的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）固定化漆酶的制备：漆酶由Cerrena sp.HYB07发酵制得，采用水热法合成磁微粒Fe₃O₄，以溶胶凝胶法在磁微粒表面包裹一层SiO₂，制备磁性二氧化硅微球 Fe₃O₄‑SiO₂，再用丙烯酰基硅烷偶联剂 MPS对Fe₃O₄‑SiO₂进行表面修饰，制得丙烯酰基改性磁性微球Fe₃O₄‑SiO₂‑MPS；采用金属离子螯合法，称取1 g Fe₃O₄‑SiO₂‑MPS加入到500 mL 0.01mol/L的CuCl₂溶液中搅拌8 h，磁铁分离去上清，去离子水洗涤数次，加入到20 mL pH3.0 PBS缓冲体系中，加入总酶量为150 U的漆酶，搅拌超声分散，放入200 r/min 20℃摇床固定5 h，磁分离去上清，蒸馏水清洗3次，收集固定化漆酶；（2）固定化漆酶催化降解大豆异黄酮：大豆异黄酮在反应体系为20 mL的B‑R缓冲液中进行酶解，底物浓度为20 mg/L，加入漆酶，调节溶液pH为2.0‑6.0，然后放置在水浴摇床在20‑60℃下反应1‑60 min，即完成大豆异黄酮的降解步骤；（3）大豆异黄酮酶解产物ESI‑MS分析：质谱条件为负电子喷射电离模式（ESI‑）下操作，使用氮气作为去溶剂化气体并保持10 L/min的流速，去溶剂化温度设定在350℃，碎片设定为90V。