[发明专利]一种用于超薄切片的植物组织整体染色法

摘要

本发明公开一种用于超薄切片的植物组织整体染色法。该方法包括如下实验步骤：(1)固定：收集成熟的青杄花粉，用戊二醛与多聚甲醛进行前固定，再使用1％锇酸进行后固定；用TCH处理，再用1％锇酸进一步沉积锇；(2)块染：用2.5％醋酸钆、2.5％醋酸钐、2％醋酸双氧铀进行块染；(3)乙醇梯度脱水：分别用30％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％乙醇进行脱水；(4)渗透：分别用乙醇与丙酮混合溶液、100％丙酮、丙酮与spurr树脂混合溶液、100％spurr树脂进行渗透处理；(5)包埋与聚合：在包埋板中加入100％spurr树脂，放入样品后置于烘箱进行聚合。本方法具操作简单、染色效果较好，图像对比度明显；还有利于超薄连续切片，为实现植物组织三维重构奠定了技术基础。

主权项

1.一种用于超薄切片的植物组织整体染色法，包括如下步骤：/n(1)固定植物材料；将成熟青杄花粉放置于由戊二醛与多聚甲醛配制的固定液进行前固定，PBS缓冲液清洗，再使用1％锇酸进行后固定；/n(2)利用TCH进行锇沉积；用1％TCH处理，常温放置30min-1h，再用1％锇酸浸渍，进一步沉积锇；/n(3)块染：分别用2.5％醋酸钆、2.5％醋酸钐、2％醋酸双氧铀对植物样品进行块染，4℃放置8-12小时或常温下放置4h；/n(4)脱水：对块染后的植物样品进行乙醇梯度脱水，分别用30％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％乙醇进行梯度脱水；/n(5)渗透：分别用乙醇与丙酮混合溶液、100％丙酮、丙酮与spurr树脂混合溶液、100％spurr树脂进行渗透处理；/n(6)包埋与聚合：在包埋板中加入100％spurr树脂，放入植物样品，调整好位置，放于烘箱进行聚合。/n