[发明专利]一种灵敏度、准确性高的同时测定尿液中NNAL和可替宁的方法

摘要

本发明公开了一种灵敏度、准确性高的同时测定尿液中NNAL和可替宁的方法。该方法包括下述步骤：1)配制含有NNAL、可替宁、同位素标记的NNAL、同位素标记的可替宁的单一标准品储备溶液；2)分别配制含有NNAL、可替宁的系列浓度的混合标样工作液，制成标准曲线；3)取待测尿样，加入含同位素标记内标的磷酸盐缓冲溶液，加入15‑25μLβ‑葡萄糖醛酸苷酶酶解；4)将酶解后的样液取出并放置至常温，进行固相萃取，进行仪器分析，根据步骤2)制成的标准曲线计算得到NNAL和可替宁的含量。该方法有效解决了现有的尿液中NNAL和可替宁的同时测试方法前处理繁琐、耗时长的问题，同时大大降低了尿液中的基质效应，提高了检测灵敏度和准确性。

主权项

1.一种灵敏度、准确性高的同时测定尿液中NNAL和可替宁的方法，其特征在于，包括下述步骤：1)分别配制含有4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇、可替宁、同位素标记的4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇、同位素标记的可替宁的单一标准品储备溶液；2)分别配制含有4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇、可替宁的系列浓度的混合标样工作液，系列浓度的混合标样工作液中，同位素标记的4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇、同位素标记的可替宁的浓度保持不变，4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇、可替宁的浓度成比例增大；将系列浓度的混合标样工作液注入色谱柱进行仪器分析，制成标准曲线；3)取待测尿样，加入含同位素标记内标的磷酸盐缓冲溶液，尿样与磷酸盐缓冲溶液的体积比为8‑12:1，所述磷酸盐缓冲溶液中同位素标记4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇和同位素标记的可替宁浓度为10ng/L和100μg/L，加入15‑25μLβ‑葡萄糖醛酸苷酶酶解，混合后，于36‑38℃恒温放置4～24小时；4)将步骤3)酶解后的样液取出并放置至常温，选用PRiME HLB固相萃取柱进行固相萃取，固相萃取柱先以甲醇和超纯水活化平衡，然后以乙酸乙酯作为洗脱液洗脱，收集洗脱液；取部分洗脱液以恒流氮气将洗脱液吹蒸至干，乙腈充分复溶后，取上清液进样进行仪器分析用于检测4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇，另一部分洗脱液直接上样用于检测可替宁，根据步骤2)制成的标准曲线计算得到4‑(甲基亚硝胺)‑1‑(3‑吡啶基)‑1‑丁醇和可替宁的含量。