[发明专利]一种通用qPCR质粒定量方法及通用引物有效
| 申请号： | 201910659057.5 | 申请日： | 2019-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN110452967B | 公开（公告）日： | 2023-10-03 |
| 发明（设计）人： | 王胜亚;梁焯;姚树元 | 申请（专利权）人： | 无锡生基医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6876;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海市汇业律师事务所 31325 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 214000 江苏省无锡市惠*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通用qPCR质粒定量方法及通用引物，包括如下步骤：寻找常用工业生产质粒骨架的高度同源序列，以这些高度同源序列为靶标设计qPCR引物；排除在大肠杆菌与人基因组中可能发生非特异扩增的引物，选择扩增片段较小的qPCR引物，并保证扩增片段为同源性最高的区域；进行SYBR‑Green qPCR实验验证引物，将含该扩增片段质粒的梯度稀释作为标准品，计算引物的扩增效率，线性相关系数，热融解曲线；在转化有含该扩增片段质粒的大肠杆菌样品中进行质粒拷贝数检测。本发明的qPCR引物针对工业生产质粒高度同源区域设计，扩增效率高、定量线性好、特异性好。由于扩增片段仅50bp，可将其用于以质粒DNA为原料生产的产品（如病毒）中质粒DNA残留定量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通用 qpcr 质粒 定量 方法 引物 | ||
【主权项】：
1.一种通用qPCR质粒定量方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1，寻找常用工业生产质粒骨架的高度同源序列，以这些高度同源序列为靶标设计qPCR引物；/n步骤2，设计引物时排除在大肠杆菌与人基因组中可能发生非特异扩增的引物，选择扩增片段较小的qPCR引物，并保证扩增片段为同源性最高的区域，即序列完全一致区域；/n步骤3，进行SYBR-Green qPCR实验验证引物，将含该扩增片段质粒的梯度稀释作为标准品，计算引物的扩增效率，线性相关系数，热融解曲线；在转化有含该扩增片段质粒的大肠杆菌样品中进行质粒拷贝数检测，根据热融解曲线验证其在大肠杆菌基因组存在时的特异性。/n
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