[发明专利]一种原位细胞RNA加尾与结构的成像方法有效
| 申请号： | 201910662069.3 | 申请日： | 2019-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN110484604B | 公开（公告）日： | 2021-01-19 |
| 发明（设计）人： | 赵永席;陈锋;白敏;薛静 | 申请（专利权）人： | 西安交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6841 | 分类号： | C12Q1/6841 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 李红霖 |
| 地址： | 710049 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种原位RNA加尾与结构的成像方法，属于原位细胞成像技术领域。以细胞内RNA加尾和不同结构为研究对象，通过点击化学编码的滚环荧光原位杂交方法(click‑encoded rolling FISH,ClickerFISH)实现RNA加尾与单链、双链结构的同时单细胞单分子成像。本发明方法所用反应体系简单，反应效率高，可实现细胞内RNA的快速、准确成像，用于研究细胞内RNA加尾，发现在不同细胞系以及细胞不同周期中，RNA加尾的发生位置及长度有所区别；用于研究细胞内RNA单链和双链结构，发现在不同细胞系以及细胞不同周期中，RNA单链和双链结构的分布所有区别。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 原位 细胞 rna 结构 成像 方法 | ||
【主权项】：
1.一种原位细胞RNA加尾与结构的成像方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)通过活细胞代谢2-炔基腺苷，将2-炔基腺苷加工在RNA poly(A)尾上，然后进行细胞固定、透性处理；/n2)通过RNA酰化试剂反应RNA单链结构；/n3)通过环状双键-补骨脂素衍生物反应RNA双链结构；/n4)通过点击化学反应分别连接步骤1)、2)和3)的不同引发链，杂交与引发链互补的环形探针，通过滚环荧光原位杂交实现目标信号的放大；/n5)通过激光共聚焦荧光显微镜进行观察，实现细胞内RNA加尾与结构的同时成像。/n
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