[发明专利]一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法及应用

摘要

本发明公开了一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法及应用。本发明采用V8酶结合V8酶和赖氨酰肽链内切酶联用，特异性水解胰岛素，通过液质联用仪建立含有胰岛素特征性片段的肽图。方法建立：使用缓冲液提供pH7.5～9.5的酶解环境，底物与酶按胰岛素:V8酶:赖氨酰肽链内切酶≈（100～1000）:（100～500）:1的质量比进行反应过夜，反应液稀释10～30倍，采用液相分离质谱检测器检测，建立各品种胰岛素的特征肽图谱。采用本发明的质谱肽图谱，可以准确的确定各种不同胰岛素，方法准确可靠。

主权项

1.一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）使用V8酶结合V8酶与赖氨酰肽链内切酶联用酶解方法鉴别各种类胰岛素；（2）V8酶与赖氨酰肽链内切酶联用酶解方法鉴别赖脯胰岛素；（2）水解条件：采用缓冲液pH7.5～9.5的酶解环境；所述的缓冲液指的是Tris‑Hcl缓冲液；（3）反应液的配制：按照胰岛素:V8酶:赖氨酰肽链内切酶≈（100～1000）:（100～500）:1的质量比分别配制反应液；（4）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比0.1%～1%甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱，流速为0.2～0.6ml/min，柱温50～60℃，质谱检测器；（5）色谱梯度条件如下：表1 流动相梯度洗脱条件(体积比)（6）测定法：取酶解样品注入液质联用仪，进行数据采集，测定酶解多肽片段的质谱图。