[发明专利]一种同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法

摘要

本发明公开了一种同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法，本发明运用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC‑MS/MS)快速同时检测口服双参平肺颗粒后大鼠血浆中芒果苷、丹参酮IIA、人参皂苷Rg1、丹酚酸B、柚皮苷、甘草苷、隐丹参酮、知母皂苷BII和甘草酸的含量。该方法包括标准品储备液的配制、内标工作液的配制、标准曲线的制备、血浆样品处理和含量测定。本发明提供的方法灵敏度高、特异性强、重现性好、操作简单快速，符合体内生物样品测定要求，并能应用于双参平肺颗粒口服给药后的药代动力学研究。

主权项

1.一种同时定量检测血浆中双参平肺颗粒主要成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)标准品储备液的配制分别精密称取人参皂苷Rg1、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮IIA、芒果苷、知母皂苷BII、柚皮苷、甘草苷、甘草酸各10mg，分别置于10ml容量瓶中，加适量甲醇超声溶解，并定容至刻度线，分别制得1.00mg/ml标准品储备液；(2)内标工作液的配制精密称取多潘立酮1mg于10mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解，并定容配成0.1mg/mL储备液；精密移取内标储备液适量，用甲醇稀释，配成浓度为0.1μg/mL的内标溶液；(3)标准曲线的制备用大鼠空白血浆，将步骤(1)的各标准品储备液配制成7个终浓度的系列血浆标准曲线样品：人参皂苷Rg1 1.3‑650ng/mL；丹酚酸B 5.0‑2495ng/mL；隐丹参酮4.5‑2250ng/mL；丹参酮IIA 2.0‑1000ng/mL；芒果苷4.5‑2250ng/mL；知母皂苷BII 5.0‑2250ng/mL；柚皮苷5.0‑2497.5ng/mL；甘草苷2.5‑1252.5ng/mL；甘草酸1.5‑751.2ng/mL；分别取各系列血浆标准曲线样品，加入步骤(2)的内标物，并加入甲酸，混匀，加入乙酸乙酯提取，离心，取上清液在离心浓缩仪上挥干，残渣用甲醇复溶，离心，取上清液注入液相色谱串联质谱法中进行分析；以待测物与内标的峰面积之比值(Y)为纵坐标，以待测物浓度(X)为横坐标，采用加权最小二乘法进行回归计算，得各标准曲线，计算权重为1/X²；(4)血浆样品处理：取灌胃双参平肺颗粒的大鼠待测血浆样品，加入步骤(2)的内标物，并加入甲酸，混匀，加入乙酸乙酯提取，离心，取上清液在离心浓缩仪上挥干，残渣用甲醇复溶，离心，取上清液作为血浆测试样品；(5)含量测定：取步骤(4)得到的血浆测试样品进样，采用液相色谱串联质谱法进行分析，记录各待测成分和内标的峰面积，代入步骤(3)制得的回归方程中，检测血浆中芒果苷、丹参酮IIA、人参皂苷Rg1、丹酚酸B、柚皮苷、甘草苷、隐丹参酮、知母皂苷BII和甘草酸的含量。