[发明专利]一种特异性识别蛋白PRM2的多克隆抗体制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201910680342.5 | 申请日： | 2019-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN110526969A | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 刘明兮;刘思钰;吴佳艳;王莹 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68 |
| 代理公司： | 11265 北京挺立专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 田黎绒<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 210005 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物科学和检测试剂技术领域，具体公开了一种特异性识别蛋白PRM2的多克隆抗体制备方法及其应用，包括如下步骤：(1)蛋白PRM2抗原表位分析：通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白PRM2的重组表达，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQ ID N0.1所示，在上、下游引物分别引入BamH1、Not I酶切位点。本发明实现PRM2的多克隆抗体的制备。 | ||
| 搜索关键词： | 抗原表位分析 蛋白 目的片段 多克隆抗体制备 多克隆抗体 基因序列 检测试剂 酶切位点 生物科学 下游引物 种特异性 重组表达 制备 引入 应用 | ||
【主权项】：
1.一种特异性识别蛋白PRM2的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)蛋白PRM2抗原表位分析：通过抗原表位分析选择目的片段用作蛋白PRM2的重组表达，所述目的片段的基因序列如序列表中SEQ ID N0.1所示，在上、下游引物分别引入BamH1、Not I酶切位点及同源臂；/n(2)提取小鼠正常睾丸组织mRNA，并以其作为模板进行反转录PCR，合成cDNA第一链然后以此为模板，进行PCR扩增；/n(3)扩增的PCR产物经纯化后，将PCR产物PRM2 DNA目的片段前后分别引入BamH1与NotI酶切位点及同源臂，并与用BamH 1和Not 1切开的的pET28a在TDNA连接酶的作用下进行连接；/n(4)连接产物转化入感受态菌BL21，挑选阳性克隆，提取质粒，经双酶切鉴定后测序，将测序正确的克隆抽提质粒，并转入BL21菌株，IPTG诱导表达，表达的目的蛋白经Ni柱纯化后，得到目的蛋白PRM2；/n(5)将步骤(4)的目的蛋白PRM2在N端添加半胱氨酸Cys标签，然后与载体蛋白KLH偶联作为抗原免疫小鼠，完成免疫周期；/n(6)以细胞株的细胞通过小鼠生产，而获得特异性识别蛋白PRM2多克隆抗体。/n
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