[发明专利]基于细胞的鉴定IDO1酶活性及筛选IDO1酶抑制剂的荧光检测方法在审
| 申请号： | 201910681140.2 | 申请日： | 2019-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN110317855A | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 狄斌;贾静;胡驰 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/26 | 分类号： | C12Q1/26;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 211198 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明建立了一种在细胞层面鉴定吲哚胺2,3‑双加氧酶1活性及筛选吲哚胺2,3‑双加氧酶1酶抑制剂的荧光检测方法。本发明可供三种仪器检测IDO1酶酶活性：1、无需对样本进行任何形式的前期处理，直接取出培养基上清使用酶标仪检测，检测对象为色氨酸。2、将细胞用混合荧光体系孵育后荧光显微镜检测。3、将细胞用混合荧光体系孵育后流式细胞仪检测。本发明提供的方法不仅缩短了检测时间，还降低了操作复杂性，可在细胞水平检测IDO1酶活性并筛选IDO1酶抑制剂。 | ||
| 搜索关键词： | 酶抑制剂 混合荧光 双加氧酶 荧光检测 酶活性 筛选 细胞 孵育 吲哚 检测 荧光显微镜检测 细胞水平检测 流式细胞仪 检测对象 前期处理 细胞层面 仪器检测 培养基 酶标仪 色氨酸 酶酶 样本 取出 | ||
【主权项】：
1.一种基于细胞的筛选IDO1酶抑制剂及鉴定IDO1酶活性的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提供重组表达IDO1的细胞，用DMEM培养基培养；2)使步骤1)的培养基上清与色氨酸感受器接触；3)测量步骤2)的混合物的荧光读数，其中在IDO1酶存在下与不加IFN‑γ诱导的细胞相比改变的荧光读数指示IDO1酶活性，在IDO1酶和IDO1酶抑制剂存在下与IFN‑γ诱导的细胞相比较，通过荧光读数的差异指示IDO1酶抑制剂的活性及IDO1酶活性。
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