[发明专利]一种人类EGFR基因突变位点T790M的检测试剂及检测方法在审
| 申请号： | 201910687652.X | 申请日： | 2019-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN110373467A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 金胜男;丁春明;栾菊 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237 | 代理人： | 林益建 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种人类EGFR基因突变位点T790M的检测试剂及检测方法,该检测试剂包括：PCR反应液I、PCR反应液II、酶消化反应液、单碱基延伸液I、单碱基延伸液II和磁微粒混悬液；基于该试剂的检测方法包括PCR反应液I，PCR反应液II对血样中的EGFR基因扩增，并加入酶消化反应液消化，消化的产物加入单碱基延伸液I，单碱基延伸液II和PCR‑SAP产物进行单碱基延伸，产物磁珠富集后进行芯片分析。本发明提供的用于检测人类EGFR基因p.T790M突变的检测试剂及方法能从10^4个DNA分子中检测到低至10个突变DNA，其灵敏度达到0.1％，实现T790M的微量检测。 | ||
| 搜索关键词： | 单碱基延伸 检测试剂 人类EGFR基因 检测 突变位点 酶消化 磁微粒混悬液 消化 磁珠富集 微量检测 芯片分析 突变DNA 血样 灵敏度 扩增 突变 | ||
【主权项】：
1.一种人类EGFR基因突变位点T790M的检测试剂，其特征在于，该检测试剂包括：PCR反应液I；PCR反应液II；酶消化反应液；单碱基延伸液I；单碱基延伸液II；磁微粒混悬液；其中，所述的PCR反应液I包含EGFR基因突变位点T790M的扩增上下游引物及其变体；其中，所述的PCR反应液II包含PCR反应所需的DNA聚合酶、dNTP、buffer；其中，所述的酶消化反应液可以消化掉反应体系中的dNTPs；其中，所述的单碱基延伸液I包含EGFR基因突变位点T790M的延伸引物及其变体；其中，所述的单碱基延伸液II包含单碱基延伸反应所需的iPLEX酶、生物素标记ddT和buffer；其中，所述的磁微粒混悬液中的磁微粒标记亲和素。
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