[发明专利]一种构建蠕形螨致玫瑰痤疮样皮损动物模型的方法

摘要

本发明公开一种构建蠕形螨致玫瑰痤疮样皮损动物模型的方法，包括通过面部蠕形螨阳性的供螨者洗净皮肤，拭干，挤压刮取鼻翼或面部皮脂分泌物，通过清洗挤压后的分泌物，制备蠕形螨原虫混悬液，并将蠕形螨原虫混悬液皮内注射于日本大耳兔背部4cm×4cm实验区中。本发明针对现有家兔对人蠕形螨自然感染途径的反应性很小，缺少蠕形螨致玫瑰痤疮样皮损动物模型的问题，采用日本大耳兔品系同时在皮内接种蠕形螨原虫，构建出蠕形螨致玫瑰痤疮样皮损动物模型，所述日本大耳兔皮损可以观察到与人类蠕形螨阳性的玫瑰痤疮高度相似的红斑、丘疹皮损临床表现及组织病理学表现，符合作为蠕形螨致玫瑰痤疮样皮损动物模型的要求。

主权项

1.一种构建蠕形螨致玫瑰痤疮样皮损动物模型的方法，其步骤是：a.清洁蠕形螨原虫混悬液的制备①供螨者：中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院皮肤科门诊患者，确诊为玫瑰痤疮，并且螨虫镜检阳性；②制备方法：供螨者温水洗净皮肤，拭干，然后使用取螨器挤压刮取鼻翼或面部皮脂分泌物，在获得的皮脂分泌物中加入一滴2%洗洁精，混合至均匀乳液状，并将均匀乳液状转移至5ml的玻璃试管中，加入2ml的1× PBS进行稀释，用洗耳球吹打混匀，置于4℃冰箱静置自然沉淀2h，弃玻璃试管中的上清液后，再次加入2ml的1× PBS进行稀释并沉淀，弃上清液后，再次重复上述操作，将清洗后的沉淀物转移入1.5ml EP管中备用；③将②中获得的最终混悬液一滴置于载玻片上，在光学显微镜下观察，若蠕形螨原虫混悬液中蠕形螨密度为＞5条/cm²，则所取蠕形螨原虫混悬液合格；b.造模前准备①选择健康的12周龄雌性普通级日本大耳兔，体重均在2.0～2.5kg之间；②备皮：剔除日本大耳兔背部脊柱一侧4cm×4cm大小区域毛作为实验区域；c.造模①选择注射部位，注射部位为日本大耳兔已备皮的实验区皮肤；②用75%酒精消毒实验皮肤区域；③将a步骤③中制备的蠕形螨原虫混悬液转移至2ml皮试注射器中，排尽含有蠕形螨原虫混悬液的2ml皮试注射器内空气，一手绷紧日本大耳兔局部皮肤，一手持注射器针头斜面向上，与皮肤呈5°刺入日本大耳兔实验区皮肤，待针头斜面完全进入皮内，放平注射器；用紧绷皮肤的手固定针栓，注入0.2ml蠕形螨原虫混悬液，使局部形成皮丘，迅速拔针，不可按压局部；d.观察方法①观察及皮损红斑评分首次注射蠕形螨原虫混悬液后观察注射部位皮损变化，并对皮肤红斑给予0～4标准评分，连续观察6周；②组织病理观察切除日本大耳兔实验区皮肤病变组织行病理检查，将所取组织进行固定、包埋，进行常规HE染色和显微镜下观察；每2周切取一次皮损，共观察6周。