[发明专利]一种示踪剂的制备和使用方法

摘要

本发明公开一种评价ALPPS术后肝脏再生能力的分子影像学方法。包括以下步骤：1）制作VX2兔肝癌模型2）兔VX2肝癌模型ALPPS手术3）18F‑氟代甲基胆碱（18F‑methylcholine，18F‑FCH）合成。4）18F‑FCH PET/CT成像及数据处理。本发明开创性的首次提出使用18F‑FCH PET/CT监测残余肝脏的增殖能力，基于18F‑FCH在残余肝脏组织中具有较高的胆碱代谢，进而间接反映细胞膜合成能力增加，从而通过分子影像学方法评价ALPPS术后残余肝脏再生能力，为临床选择ALPPS选择二期手术的最佳时间提供了重要的新思路。

主权项

1.一种评价ALPPS术后肝脏再生能力的分子影像学方法，其特征在于步骤如下：/n步骤一 制作VX2兔肝癌模型/n首先将VX2瘤株经传代后接种兔后腿外侧肌肉内，经3周肿瘤生长至直径大小2.0-3.0cm；将兔后腿肌肉内肿瘤取出，剔除坏死组织，选取肿瘤边缘的鱼肉样组织，并用眼科剪将肿瘤组织剪碎成1mm³组织块，用生理盐水反复清洗，于无菌培养皿中备用；将实验兔全麻，呈仰卧位固定于动物手术台上；对兔腹部手术区备皮，消毒，铺无菌手术洞巾；于剑突下1cm处沿腹白线注射利多卡因行局部麻醉，并作上腹正中切口，逐层切开腹壁，暴露肝脏左外侧叶；于肝叶较厚处划开形成一个约3mm×3mm大小的孔道，将3-5个瘤块植入其中，接种后用明胶海绵颗粒填塞肝脏切口，并按压止血，缝合切口，关腹；/n步骤二 兔VX2肝癌模型ALPPS手术/n兔肝种植VX2瘤株两周后，荷瘤兔行ALPPS一期手术；/n荷瘤兔随机分成ALPPS组和Sham组；将ALPPS组兔术前禁食12小时，全身麻醉后，仰卧位固定于兔台上，术区备皮；于剑突下偏左注射利多卡因，对切口周围进行麻醉后开腹，切口长5-7cm，暴露并分离门静脉左支，并用4-0手术缝线结扎，待左肝与右肝之间的缺血线形成，用手术剪沿着缺血线离断肝实质；止血，缝合腹壁切口，关闭腹腔，消毒；/n步骤三 ¹⁸F-FCH合成/n采用GE Tracerlab FX-_FN模块全自动化合成；具体步骤如下：/n（1）[18F]由回旋加速器PETtrace 通过¹⁸O（p，n）¹⁸F反应生产 ；/n（2）将[18F]氟化物从回旋加速器递送并捕获在QMA-Light Sep-Pak除去[18O] H₂O；/n（3）[18F]然后使用K₂CO₃溶液；将氟化物洗脱到反应容器中；/n（4）将kryptofix_2.2.2的溶液加入到反应容器中；加热至 80℃并抽真空4分钟；/n（5）将反应容器冷却至60±1℃，同时进行氦气流，4分钟真空吸附；/n（6）将二甲基二甲苯磺酸7-8mg在无水乙腈和无菌水中的溶液加入到干燥的[18 F]氟化物中，并将反应物加热至120℃，同时搅拌10分钟 ；随后将反应混合物冷却至 50℃；/n（7）然后加入胆碱前体DMAE，将其加热至120℃，再搅拌10分钟；/n（8）然后将反应混合物冷却至60℃，并通过保持60℃进行反应溶剂的蒸发，并使反应连续进行氦气流并真空抽吸5分钟；/n（9）将无菌水加入到干燥后的反应物中，通过C18-Plus Sep-Pak进入含有乙醇的圆底烧瓶中以捕获未反应的ditosylmethane和[18 F]氟甲基甲苯磺酸盐，以及作为副产物生成的任何甲苯磺酰甲基胆碱；/n（10）将水/乙醇混合物通过CM-Light Sep-Pak转移至所需的[18 F]氟甲基胆碱；/n（11）用乙醇洗涤CM-Light Sep-Pak以除去未反应的DMAE和水，以除去残留的乙醇至废物；/n（12）随后将[18 F]氟甲基胆碱洗脱到含有0.9%注射用生理盐水；/n（13）然后将最终制剂通过0.22mm无菌过滤器进入无菌剂量小瓶中，以提供¹⁸F-FCH作为等渗溶液，获得产物；产物¹⁸F-FCH放化纯度大于90%，比活度>30 GBq/μmol，可用于PET成像；/n步骤四 ¹⁸F-FCH PET/CT成像及数据处理/nALPPS组和Sham组荷瘤兔分别在手术前0d、术后1d、3d、7d、14d，进行¹⁸F-FCH PET/CT扫描；/n1）兔禁食6小时以上，全身麻醉；/n2）每组荷瘤兔经耳源静脉通道分别注入37MBq/kg（1mci/kg）¹⁸F-FCH；/n3）注射¹⁸F-FCH 1h后进行PET/CT扫描；将实验兔仰卧位固定在扫描床，先行低剂量螺旋CT轴位扫描，再行PET发射扫描；用低剂量CT做衰减校正、迭代重建得到PET图像，将图像数据传入GE AW4.6 PET后处理工作站，得到实验兔的CT、PET及PET/CT的融合图像；CT扫描参数为：电压120KV，电流10mA，层厚3.33mm；PET采集方式：3D模式，扫描床位数1个，每个床位3min；/n4）兔¹⁸F-FCH PET/CT图像上，勾画出残余肝脏的兴趣区进而获得最大标准摄取值和平均标准摄取值；同时通过GE AW4.6工作站，勾勒出肝脏三维结构，测得肝脏功能性体积。/n