[发明专利]蚓激酶与粗制蚯蚓卵磷脂的联合制备工艺

摘要

本发明公开了一种蚓激酶与粗制蚯蚓卵磷脂的联合制备工艺，本发明经过蚯蚓浆料制备，蚓浆分离，盐析恒温破乳，离心分离蚯蚓脂质，脂质中萃取卵磷脂，提取蚓激酶等步骤，采用先提取粗制蚯蚓卵磷脂，可降低蚓激酶除杂工序负担，且不影响蚓激酶原有生产过程及产品的性价比，有利于提高蚓激酶的收率和品质，且粗制蚯蚓卵磷脂的获取，增加了蚯蚓的利用度。

主权项

1.一种蚓激酶与粗制蚯蚓卵磷脂的联合制备工艺，其特征在于，包括：/na)蚯蚓浆料制备/n排空蚯蚓腹腔杂物、清洗干净后，冷冻，得到冻蚯蚓；将冻蚯蚓室温解冻后制成浆，得到蚯蚓浆料；/nb)蚓浆分离/n将步骤a)得到的蚯蚓浆料在40～56℃的水浴锅中保温3～4h后，在12000r/min下离心除渣，得到上清液；/nc)盐析升温破乳/n向步骤b)得到的上清液中加入无机盐，直至上清液中无机盐的含量为0.6mol/Lol/L，再升温至40～45℃，保持40～60min，得到破乳液；/nd)离心分离蚯蚓脂质/n将步骤c)得到的破乳液中加入无机盐直至无机盐的浓度为1mol/L，并温度为40～50℃，速度为3000r/min下离心60min，得到蚯蚓脂质，收集离心液；/ne)脂质中萃取卵磷脂/n向步骤d)得到的蚯蚓脂质中加入无水乙醇，得到乙醇溶出物；将乙醇溶出物中无水乙醇除去，再加入氯仿，得到氯仿溶出物；向氯仿溶出物中加入丙酮，并在4000r/min下离心15min，得到蚯蚓卵磷脂；/nf)提取蚓激酶/n将步骤d)收集到的离心液通入截留分子量为100000D的膜过滤器，得到过滤液；再将过滤液通入截留分子量为5000D的中空纤维膜组件，得到浓缩液，再向浓缩液中加入纯净水，再通入截留分子量为5000D的中空纤维膜组件，得到浓缩蚓激酶上柱液。将浓缩液通过阴离子交换纤维素树脂离子交换层析进行分离纯化层析，用0.5-2mol/L的氯化钠对层析后的产物进行阶段洗脱，经脱盐、浓缩、冷冻干燥得到蚓激酶。/n