[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的电化学方法

摘要

一种检测金黄色葡萄球菌的电化学方法，属于分析化学及环境污染检测技术领域。本发明采用具有特殊切割位点的切刻内切酶Nb.bpu10I和强链置换效应的Bsm DNA聚合酶通过链置换扩增反应获得大量单链DNA扩增序列。将扩增序列加入到电极系统中，与MB序列完全互补，打开三链结构，使G四链体电化学信号释放。通过电化学信号与金黄色葡萄球菌数量的关联，实现了对湖水中的金黄色葡萄球菌的数量检测。本发明方法具有回收率高，灵敏度高，特异性强等优点。

主权项

1.一种检测金黄色葡萄球菌的电化学方法，其特征是：基于链置换扩增技术和三螺旋分子开关；步骤如下：首先将生物素修饰的适配体和cDNA序列高温变性，复性后在适宜温度下形成部分互补双链结构；将互补双链溶液加入链霉亲和素磁珠体系中共同孵育，通过生物素‑链霉亲和素的结合使部分互补双链修饰到磁珠表面；同时，电极上修饰包含有G四链体结构的捕获探针，与MB序列茎端互补形成三螺旋结构而捕获MB序列，此时G四链体信号关闭；在金黄色葡萄球菌存在的情况下，磁珠上部分互补双链中适配体与金黄色葡萄球菌结合，使cDNA释放；将引物，Nb.bpu10I切刻内切酶和Bsm DNA聚合酶加入到cDNA溶液中，Bsm DNA聚合酶通过聚合反应合成完全互补的双链，Nb.bpu10I切刻内切酶在双链分子切割位点处形成切口，Bsm DNA聚合酶从断裂位点处继续合成DNA链，替换旧链，实现循环放大扩增出大量单链DNA；该单链DNA与电极上MB序列形成完全互补序列双链，从而破坏了电极上原有的三螺旋结构，使得捕获探针释放G四链体电化学信号；建立电化学信号强度与金黄色葡萄球菌数量间线性关系的标准曲线，利用该标准曲线计算样品中的金黄色葡萄球菌含量。