[发明专利]肝前体样细胞系、构建方法以及在生物人工肝领域的应用

摘要

本发明提供了肝前体样细胞系的构建方法以及保藏编号为CCTCC NO：C2019120的肝前体样细胞系。所述构建方法包括以原代肝细胞为种子细胞来构建所述肝前体样细胞系，结合对传代培养、再传代培养、病毒感染、扩增培养和汇合培养的工艺参数进行控制，并通过在永生化细胞系中过表达肝细胞特异性转录因子FOXA3，使得到的所述肝前体样细胞系容易实现良好的肝向分化。本发明还提供了通过所述构建方法得到的肝前体样细胞系在生物人工肝领域的应用。

主权项

1.一种肝前体样细胞系的构建方法，其特征在于，包括：S1：提供原代肝细胞培养物，对所述原代肝细胞培养物进行增殖培养和传代培养，以得到待转染细胞培养物，所述传代培养的传代比例1:3‑1:6，传代次数为2‑30；S2：将所述待转染细胞培养物以0.5×10⁴‑1×10⁵个/平方厘米的接种密度进行汇合培养，以得到汇合率不低于80％的贴壁细胞；S3：通过慢病毒悬液和病毒感染增强悬液对所述贴壁细胞进行病毒感染，并在所述病毒感染的过程中进行培养基置换，所述慢病毒悬液中的慢病毒数量是所述贴壁细胞数量的0.5‑50倍，所述病毒感染增强悬液的浓度为6‑12微克/毫升；S4：通过筛选剂和扩增培养基对经所述病毒转染后得到的细胞培养物进行扩增培养和再传代培养，得到永生化细胞系，所述扩增培养的时间为24‑96小时，所述再传代培养的传代比例为1:3‑1:6，传代次数为10‑100；S5：在所述永生化细胞系中过表达肝细胞特异性转录因子，以得到所述肝前体样细胞系。