[发明专利]检测诺如病毒I型、诺如病毒II型和轮状病毒的试剂盒

摘要

诺如病毒I型、诺如病毒II型和轮状病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）技术领域：本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测诺如病毒I型、诺如病毒II型和轮状病毒的试剂盒及其使用方法。技术问题：三种病毒均属于腹泻的主要病原体，转播途径和感染后症状等都非常相似，而市面上检测单项病原体的产品无法满足快速检测、区分三种病原体的需求。技术方案：按照荧光PCR法原理，根据三种病毒的核酸序列特点，挑选其各自的特异性保守序列并设计相应的引物即TaqMan荧光探针。主要用途：本试剂盒用于粪便、肛拭子或呕吐物等标本中，同时对上述三种病毒核酸进行定性检测。

主权项

1.一种用于检测诺如病毒I型、诺如病毒II型和轮状病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒由混合反应物(2X)(包括Taq热启动DNA聚合酶、UNG酶、TaqMan荧光探针、PCR缓冲液、dATP、dUTP、dCTP、dGTP、MgCl2等)、酶混合物(20X)(Luna温启动逆转录酶和小鼠RNase抑制剂)、正向引物、反向引物、阳性质控品和无RNase水组成；其中，混合反应液中包括有诺如病毒I型、诺如病毒II型和轮状病毒的特异性保守序列的引物及TaqMan荧光探针；所述特异性保守序列的引物序列为：诺如病毒I型，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；诺如病毒II型，SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；轮状病毒，SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8；所述特异性保守序列的TaqMan探针序列为：诺如病毒I型，SEQ ID NO.3；诺如病毒II型，SEQ ID NO.6；轮状病毒，SEQ ID NO.9。其中，SEQ ID NO.1：TGGAYGCGAT TVCATGASEQ ID NO.2：CTTAGACGCS ATCATCATTSEQ ID NO.3：AGATHGCGGT CTCCTGTCCSEQ ID NO.4：CARGARBCNA TGTTYARRTG GATGSEQ ID NO.5：GACGCCATCT WCATTCACASEQ ID NO.6：TGKGAGKGCG ATCGCAATSEQ ID NO.7：ABCTACMCAT GACCCTCSEQ ID NO.8：GGTCACATAA CKCCCCSEQ ID NO.9：ACAATAGTTA AMAGCTAACA CTGWC。